秦艽的組織培養(yǎng)、發(fā)根體系建立及發(fā)根中次生代謝產(chǎn)物的變化.pdf

1、本文以秦艽的葉和下胚軸為外植體，成功的誘導(dǎo)出愈傷組織和再生植株。誘導(dǎo)愈傷組織最合適的培養(yǎng)基為附加2mgL-12，4-D和0.5mgL-16-BA的MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率可達(dá)到100％。愈傷組織轉(zhuǎn)移到附加2mg·L-12，4-D和0.5mg·L-1KT和500mg·L-1LH的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，增殖后的愈傷組織轉(zhuǎn)移到附加0.1mg·L-12，4-D和0.5mg·L-16-BA的MS分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化，其分化率可達(dá)到86.67％，將分

2、化出的芽轉(zhuǎn)接到不加激素的MS上，結(jié)果可生長(zhǎng)出大量的分化苗。 運(yùn)用發(fā)根農(nóng)桿菌A4和LBA9402Bin19分別感染秦艽的外植體，經(jīng)實(shí)驗(yàn)可得，只有在加入6mg·L-1IBAMS培養(yǎng)基上才能成功的誘導(dǎo)出發(fā)根，并且以葉片為外植體時(shí)，誘導(dǎo)發(fā)根的頻率最高，其中A4的轉(zhuǎn)化率為87％，LBA9402Bin19的轉(zhuǎn)化率為63％。將發(fā)根在無(wú)激素的MS培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)，表現(xiàn)出大量的分枝和無(wú)向地性等特點(diǎn)。經(jīng)除菌和篩選后，將發(fā)根轉(zhuǎn)接到不含激素的1/2MS液

3、體培養(yǎng)基上，120r/min，26±2℃黑暗條件下，發(fā)根表現(xiàn)出快速生長(zhǎng)的特性，其中A4轉(zhuǎn)化根每天的平均增加量為95mg/g，LBA9402Bin19轉(zhuǎn)化根每天的平均增加量為124mg/g。經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)可知，A4和LBA9402Bin19的Ri質(zhì)粒中的T-DNA已經(jīng)成功的整合到發(fā)根的基因組DNA中。同時(shí)經(jīng)過(guò)形態(tài)觀察，經(jīng)A4和LBA9402Bin19感染轉(zhuǎn)化的發(fā)根符合發(fā)根的基本形態(tài)特點(diǎn)。應(yīng)用HPLC檢測(cè)得知，A4轉(zhuǎn)化的發(fā)根中的龍膽苦甙含量