茅蒼術(shù)揮發(fā)油誘導(dǎo)人類胃腺癌MKN-45細(xì)胞脹亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 探討茅蒼術(shù)揮發(fā)油(EssentialoilextractedfromrhizomeofAtractylodelancea.，EOEAL)誘導(dǎo)人類胃癌細(xì)胞株MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡的可能性及發(fā)生機(jī)制，為開發(fā)抗腫瘤藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1.使用揮發(fā)油提取器提取茅蒼術(shù)揮發(fā)油。
　　 2.通過MTT法確定EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞脹亡的作用濃度（IC50值）;倒置顯微

2、鏡觀察EOEAL誘導(dǎo)胃癌MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡的形態(tài)學(xué)變化。
　　 3.通過不同鹽水濃度研究滲透壓環(huán)境對(duì)EOEAL誘導(dǎo)MKN-45發(fā)生脹亡的影響;通過WesternBlot法檢測EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡時(shí)細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)的變化;通過間接免疫熒光法檢測EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡時(shí)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化;通過EGTA和不同分子量的PEGs檢測EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞發(fā)生的脹亡是否受鈣離子的影響，并推測細(xì)胞膜

3、形成孔徑的大小;通過RNA沉默法檢測穿孔素蛋白在EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞脹亡中的作用;通過ELISA法檢測EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡時(shí)細(xì)胞分泌功能的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT法實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EOEAL作用于胃癌MKN-45細(xì)胞1.5h的IC50濃度為2μl/ml。
　　 2.2μl/mlEOEAL作用MKN-45細(xì)胞1-2h的過程中，細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，細(xì)胞質(zhì)崩解。3.滲透壓實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明EO

4、EAL誘導(dǎo)的細(xì)胞脹亡與高滲、低滲環(huán)境引起的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變無關(guān)。
　　 4.WB和間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:EOEAL誘導(dǎo)的MKN-45細(xì)胞脹亡不破壞細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，不影響細(xì)胞骨架。
　　 5.EGTA和PEGs實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:EOEAL誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞脹亡的機(jī)制可能與鈣離子濃度無關(guān)，細(xì)胞膜上可能誘導(dǎo)出現(xiàn)影響細(xì)胞滲透壓平衡的孔道。
　　 6.穿孔素蛋白沉默實(shí)驗(yàn)表明穿孔素蛋白并非MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡的主要因素。

5、r>　　 7.ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:EOEAL作用于胃癌MKN-45細(xì)胞后可以抑制IL-8的分泌，微促進(jìn)TNF-α的分泌。
　　 結(jié)論:
　　 1.茅蒼術(shù)揮發(fā)油可以誘導(dǎo)MKN-45細(xì)胞發(fā)生脹亡，并對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)造成嚴(yán)重破壞。
　　 2.茅蒼術(shù)揮發(fā)油誘導(dǎo)的MKN-45細(xì)胞脹亡為一個(gè)不可逆的進(jìn)程，只要出現(xiàn)早期脹亡的特征，即便立刻去除茅蒼術(shù)揮發(fā)油等誘導(dǎo)因素也無法阻止脹亡的發(fā)生。
　　 3.低滲環(huán)境引起的細(xì)胞腫脹

6、與脹亡可形成放大效應(yīng)，但是高滲環(huán)境引起的細(xì)胞皺縮不能阻止脹亡發(fā)生。
　　 4.茅蒼術(shù)揮發(fā)油誘導(dǎo)的MKN-45細(xì)胞脹亡不會(huì)對(duì)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)造成損傷，也不會(huì)降解胞質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞骨架。
　　 5.茅蒼術(shù)揮發(fā)油誘導(dǎo)的MKN-45細(xì)胞脹亡的機(jī)制可能是誘導(dǎo)細(xì)胞膜形成了孔道，造成細(xì)胞內(nèi)外滲透壓失衡，形成的孔道可以通過分子量在4000以下的物質(zhì)。
　　 6.茅蒼術(shù)揮發(fā)油提取物誘導(dǎo)的MKN-45細(xì)胞脹亡的過程中，穿孔素蛋白的作用可能是一條