蒼術素誘導人胃癌MKN-45細胞凋亡的實驗研究.pdf

1、目的:
　　探討蒼術素(Atractylodin)抑制人胃癌MKN-45細胞增殖的作用及其作用機制，為研發(fā)新型抗腫瘤藥物提供實驗依據(jù)和理論基礎。
　　方法:
　　1.倒置顯微鏡觀察蒼術素對MKN-45細胞形態(tài)的影響;MTT法測定蒼術素誘導MKN-45細胞半數(shù)致死的藥物濃度和時間。
　　2.熒光顯微鏡結合Hoechst33258/PI染色觀察蒼術素對MKN-45細胞凋亡形態(tài)的影響。
　　3.流式細胞儀結合PI

2、染色和Annexin V/PI染色檢測蒼術素對MKN-45細胞的細胞周期的影響及細胞凋亡率。
　　4.Western blot法檢測經(jīng)蒼術素處理后MKN-45細胞相關凋亡蛋白表達的變化。
　　5.液相芯片法檢測蒼術素對MKN-45細胞分泌相關細胞因子的影響。
　　結果:
　　1.不同濃度蒼術素作用于MKN-45細胞后，濃度在5mg/L和10mg/L時促進細胞增殖;濃度大于20mg/L時，抑制細胞增殖，且抑制作用呈

3、時間和濃度依賴性。
　　2.光鏡和熒光顯微鏡下可見經(jīng)濃度大于20mg/L的蒼術素處理12h后的細胞出現(xiàn)細胞凋亡的形態(tài)學特征。
　　3.流式細胞儀結果可見MKN-45細胞的細胞周期停滯在G1期，凋亡細胞數(shù)量隨時間和濃度的增加而增多。
　　4.Western blot結果顯示經(jīng)蒼術素處理后，MKN-45細胞的PARP-1的表達量明顯增高，AIF被激活;caspase3、caspase8和caspase9未被激活，caspa

4、se3和caspase9前體蛋白表達量不變。
　　5.液相芯片結果表明，蒼術素抑制MKN-45細胞分泌IL-6、TNF-α、IL-10和IL-12p70，誘導細胞分泌IL-7和IL-1β。
　　結論:
　　本研究結果顯示，蒼術素抑制MKN-45細胞增殖，且抑制作用呈時間和濃度依賴性。蒼術素通過阻斷細胞周期、使細胞周期停滯在G1期，經(jīng)由非依賴caspase的PARP-1/AIF信號通路誘導細胞凋亡和影響細胞相關細胞因子的