MS-275對(duì)MKN-45細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　胃癌是消化系統(tǒng)高發(fā)惡性腫瘤，居癌癥死亡率的第二位。近年來，胃癌患者發(fā)病率持續(xù)增加。我國每四個(gè)因癌癥死亡的患者中就有一個(gè)是胃癌患者。目前，治療胃癌的手段主要包括手術(shù)、放射、化學(xué)、免疫和中醫(yī)治療等。早期胃癌可以通過手術(shù)治療達(dá)到較好療效，中晚期胃癌采用手術(shù)、放化療等不僅效果不理想，而且易引起多種并發(fā)癥。所以，目前胃癌研究的重點(diǎn)是尋找到一種更有效的治療方法。近年來發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞組蛋白乙酰化和去乙?；嘘P(guān)，去乙酰化轉(zhuǎn)移酶

2、抑制劑（histone deacetylase inhibitors，HDACIs）具有抑制腫瘤細(xì)胞生長并誘導(dǎo)凋亡的作用。MS-275作為HDACIs的一種，在一定濃度范圍內(nèi)，能選擇性殺傷胃癌細(xì)胞，而對(duì)正常胃粘膜細(xì)胞沒有影響，但具體的作用機(jī)理尚不明確。因此，本試驗(yàn)采用胃癌細(xì)胞MKN-45與正常胃粘膜細(xì)胞GES-1對(duì)照研究，進(jìn)一步探討MS-275體外抑制胃癌細(xì)胞MKN-45生物活性的作用機(jī)制及相關(guān)信號(hào)通路。
　　研究方法：
　

3、　1)細(xì)胞存活率：用不同濃度MS-275處理MKN-45細(xì)胞和GES-1細(xì)胞，WST-1法檢測細(xì)胞存活率。
　　2)細(xì)胞毒性：采用乳酸脫氫酶檢測試劑盒，檢測經(jīng)不同濃度MS-275處理 MKN-45細(xì)胞和GES-1細(xì)胞后，細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶的含量。
　　3)細(xì)胞活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）釋放量：采用流式細(xì)胞儀，檢測不同濃度MS-275單獨(dú)處理及加入ROS抑制劑，MKN-45細(xì)胞中ROS的

4、釋放量。
　　4)細(xì)胞JC-1：采用流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測經(jīng)不同濃度MS-275處理后，MKN-45細(xì)胞的線粒體膜電位變化。
　　5)RT-PCR、Western blotting檢測 MS-275對(duì)MKN-45細(xì)胞周期相關(guān)基因Cyclin B、Cyclin E、p21的mRNA及其蛋白表達(dá)水平的影響。
　　6)RT-PCR、Western blotting檢測MS-275對(duì)MKN-45

5、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Endo G、TRX、TBP-2的mRNA及其蛋白表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　1)采用相同濃度的MS-275分別處理正常胃粘膜細(xì)胞GES-1和胃癌細(xì)胞 MKN-45。GES-1細(xì)胞的生長沒有受到抑制，但MS-275可顯著抑制MKN-45細(xì)胞的生長，且具有時(shí)間和劑量依賴性。
　　2)MS-275處理后，可明顯增加MKN-45細(xì)胞培養(yǎng)基中LDH的含量，且呈劑量依賴性，GES-1細(xì)胞

6、培養(yǎng)基中無明顯改變。
　　3)MS-275增加了MKN-45細(xì)胞中ROS的釋放量，ROS抑制劑可顯著降低其釋放量。MS-275可使MKN-45細(xì)胞中線粒體膜電位降低，且呈劑量依賴性。
　　4)RT-PCR和Western Blotting結(jié)果表明，MS-275可下調(diào)細(xì)胞周期蛋白Cyclin B的mRNA及蛋白表達(dá)水平，下調(diào)細(xì)胞周期蛋白Cyclin E的蛋白表達(dá)水平，上調(diào)細(xì)胞周期抑制蛋白p21的mRNA及蛋白表達(dá)水平。

7、　　5)RT-PCR和Western Blotting結(jié)果表明，MS-275可上調(diào)細(xì)胞凋亡因子Caspase-3的蛋白表達(dá)水平，上調(diào)促細(xì)胞凋亡因子Endo G的蛋白表達(dá)水平。MS-275還可上調(diào)TBP-2基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平，下調(diào)TRX基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　MS-275能夠選擇性抑制胃癌細(xì)胞 MKN-45的生長并誘導(dǎo)其凋亡，但對(duì)正常的胃粘膜細(xì)胞GES-1無明顯影響。其主要機(jī)制是：MS-275