匹伐他汀后處理聯(lián)合缺血后處理減輕在體糖耐量異常大鼠心肌缺血-再灌注損傷.pdf

1、缺血后處理能減輕心肌缺血再灌注損傷(MIRI)已成共識(shí)。近年，研究證實(shí)他汀類(lèi)藥物在心肌缺血再灌注損傷過(guò)程中也具有心肌保護(hù)效應(yīng)，與其抗氧化作用和激活磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶-內(nèi)皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信號(hào)通路等機(jī)制有關(guān)。目前，已有實(shí)驗(yàn)證明缺血后處理和他汀后處理同時(shí)干預(yù)心肌缺血再灌注模型，也能通過(guò)激活PI3K-Akt-eNOS信號(hào)通路發(fā)揮心肌保護(hù)作用。但是在糖耐量異常(IGT)狀態(tài)下，其心肌保護(hù)作用是

2、否仍然存在及其可能作用機(jī)制尚不清楚。
　　 目的:建立實(shí)驗(yàn)性糖耐量異常大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型，探討匹伐他汀后處理聯(lián)合缺血后處理對(duì)在體糖耐量異常大鼠心肌缺血/再灌注損傷是否具有保護(hù)效應(yīng)及其可能的機(jī)制。
　　 方法:(1)清潔級(jí)、雄性Wistar大鼠117只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組，n=12)，糖耐量異常模型組(B組，n=105只)。B組注射鏈尿佐菌素30mg/kg后普通飼料喂養(yǎng)，4周后測(cè)體重、空腹血糖，并經(jīng)OGTT

3、實(shí)驗(yàn)測(cè)定糖耐量，測(cè)0.5h、1h、2h血糖，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)甘油三酯、總膽固醇，ELISA法測(cè)定血胰島素水平及胰腺組織HE染色觀察。(2)選取成模糖耐量異常Wistar大鼠72只，隨機(jī)分為6組(n=12):假手術(shù)組(B1組)，冠脈只穿線(xiàn)，但不結(jié)扎；缺血/再灌注對(duì)照組(B2組)，結(jié)扎LAD30min，之后再灌注2h；缺血后處理組(B3組)，于缺血30min后，再灌注即刻連續(xù)給予3次10s再灌注(R)/10s缺血(I)；匹伐他汀后處理組(B

4、4組)，于缺血30min后，再灌注前3min頸外靜脈緩慢推注匹伐他汀0.1mg/kg；匹伐他汀后處理+缺血后處理組(B5組)，再灌注前3min頸外靜脈緩慢推注匹伐他汀0.1mg/kg，再灌注即刻給予連續(xù)3次10s R/10s I；匹伐他汀后處理+缺血后處理+PI3K抑制劑(LY294002)組(B6組)，分別于再灌注前15min、前3min經(jīng)頸外靜脈緩慢推注LY294002 0.3mg/kg、匹伐他汀0.1mg/kg，再灌注即刻予連續(xù)3

5、次10s R/10s I。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色測(cè)定心肌梗死面積，電鏡觀察心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)變化，Western-blot法測(cè)定心肌組織總Akt蛋白、磷酸化Akt蛋白、總eNOS蛋白及磷酸化eNOS蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:(1)與正常對(duì)照組(A組)相比，糖耐量異常組(B組)空腹血糖水平無(wú)顯著性差異(3.14±1.40mmol/Lvs. 3.92±0.97mmol/L，P>0.05)，體重明顯增加(305.37±19

6、.30gvs. 352.84±43.24g，P<0.05)。B組血清空腹胰島素水平較A組無(wú)明顯差異(25.62±3.54 mIU/mlvs. 23. 45.±2. 40mIU/ml，P>0.05)，B組2h胰島素水平均較A組顯著增高 (67.28±2.43mIU/mlvs. 39.86±5. 98mIU/ml，P<0.05)。 (2)與假手術(shù)組(B1組)相比，缺血/再灌注損傷組(B2組)心肌梗死面積顯著增高{(70.1±3.1)％vs.

7、(0±0)％，P<0.05}，線(xiàn)粒體評(píng)分明顯升高(3.24±0.74vs. 0.00±0.00，P<0.05)。(3)與缺血/再灌注組(B2組)相比，缺血后處理組(B3組)、匹伐他汀后處理組(B4組)、匹伐他汀后處理+缺血后處理組(B5組)心肌梗死區(qū)面積均明顯減小(P<0.05)，心肌細(xì)胞線(xiàn)粒體超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕(P<0.05)，均能通過(guò)激活PI3K通路，誘導(dǎo)Akt磷酸化及其下游eNOS磷酸化水平明顯增高(P<0.05)，血清CK-M

8、B均明顯降低(P<0.05)。(4)與單純?nèi)毖筇幚斫M、單純匹伐他汀后處理組比較，匹伐他汀后處理+缺血后處理組心肌細(xì)胞梗死區(qū)面積明顯減小{(33.4±6.5)％vs. (45.3±4.6)％，(43.2±4.1)％，P<0.05}，心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕(1.23±0.68vs. 2.28±0.77，2.33±0.79，P<0.05)，Akt磷酸化和eNOS磷酸化水平均明顯增加(P<0.05)，血清CK-MB明顯降低(P<0.05

9、)。(5)匹伐他汀后處理+缺血后處理+LY29400組(B6組)Akt磷酸化及eNOS磷酸化表達(dá)水平較單純?nèi)毖筇幚斫M、單純匹伐他汀后處理組及匹伐他汀后處理+缺血后處理組明顯降低，表明PI3K抑制劑LY294002能夠阻斷匹伐他汀后處理、缺血后處理及匹伐他汀后處理+缺血后處理對(duì)PI3K通路的激活。
　　 結(jié)論：(1)通過(guò)對(duì)大鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素，4周后成功建立糖耐量異常大鼠模型；在此基礎(chǔ)上建立大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型，為研