山茱萸-熟地黃藥對與腸道菌群的相互作用研究.pdf

1、慢性腎炎是由眾多病因誘發(fā)的一種常見腎小球疾病，其發(fā)病率正逐年增加。慢性腎炎的發(fā)展隱匿且速度較慢，但最終可導(dǎo)致腎功能的慢性衰竭，同時伴隨高血壓、血尿、蛋白尿、腎功能損壞等臨床癥狀，是造成患者死亡的首要原因之一。傳統(tǒng)中藥用于臨床治療已有數(shù)千年的歷史，山茱萸-熟地黃藥對出自《金匱要略》，是治療腎病的常用藥對。山茱萸主要活性成分是馬錢苷和莫諾苷，而熟地黃主要活性成分則是梓醇和毛蕊花糖苷。傳統(tǒng)中藥通常采用用口服的方式給藥，中藥活性成分在腸道內(nèi)與腸

2、道微生物接觸的過程中，由于腸道菌群可產(chǎn)生多種代謝藥物的酶類，從而可能引起活性化合物的生物利用度及其藥理活性的改變。本文研究了腸道菌群與山茱萸-熟地黃藥對的體外相互作用以及該藥對在大鼠的體內(nèi)過程，以探討活性成分在機體內(nèi)的變化規(guī)律，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　1.山茱萸-熟地黃藥對與人腸道細菌的相互作用研究
　　依照《伯杰細菌鑒定手冊》（第八版），采用菌落形態(tài)、顯微形態(tài)等微生物學(xué)方法，并結(jié)合16s rRNA分析的分子生物學(xué)技術(shù)

3、，從健康人的糞便中分離并鑒定了Escherichia、Enterococcu和Bacillus屬約100種腸道細菌，將山茱萸、熟地黃的主要活性成分單體、單煎液與合煎液分別與分離得到的腸道細菌恒溫厭氧培養(yǎng)，采用UPLC-QTOF/MS技術(shù)尋找和鑒定孵育樣品中的代謝產(chǎn)物。此外，考察了山茱萸、熟地黃及其藥對提取液對4種代表性腸道細菌雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸桿菌和腸球菌等的調(diào)控作用。
　　與空白樣品UPLC/MS圖譜對比分析腸道細菌的代謝情

4、況，結(jié)果表明:人腸道細菌對山茱萸、熟地黃中的活性成分具有去糖基、氫化、羥基化、甲基化、乙酰化等生物轉(zhuǎn)化能力。對于馬錢苷、莫諾苷和梓醇，約56％腸道細菌具有脫葡萄糖基的功能，去糖基反應(yīng)是腸道細菌的主要代謝途徑，去糖基后，一些腸道細菌可對苷元進一步轉(zhuǎn)化。對于毛蕊花糖苷，去咖啡?；悄c道細菌的主要代謝途徑，約55％人腸道菌具有此功能。單一菌株與混合菌群相比，轉(zhuǎn)化能力較強;中藥配伍使用，轉(zhuǎn)化液中的活性成分及其腸道細菌代謝物含量降低。山茱萸、熟地

5、黃提取物對4種代表性人腸道細菌的調(diào)控實驗表明，山茱萸、熟地黃單煎液與合煎液均促進有益菌雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長，而對有害菌腸桿菌和腸球菌的生長具有抑制作用;與單煎液相比，合煎液對腸道菌群的調(diào)控作用更加顯著。
　　2.山茱萸-熟地黃藥對的大鼠腸道細菌代謝研究
　　采用單次尾靜脈注射阿霉素的方法成功復(fù)制了慢性腎炎的模型大鼠后，將山茱萸、熟地黃單煎液與合煎液分別與正常和模型大鼠的腸道菌液共同恒溫厭氧培養(yǎng)，采用UPLC-QTOF/M

6、S技術(shù)尋找和鑒定可能的代謝產(chǎn)物。
　　山茱萸的大鼠腸道菌群代謝物主要包括馬錢素、氫化馬錢素、去甲基氫化馬錢素、去甲基莫諾苷苷元、去羥基莫諾苷苷元。熟地黃的代謝產(chǎn)物主要有梓醇苷元、氫化梓醇苷元、去咖啡?；锘ㄌ擒?、咖啡酸、甲基咖啡酸、羥基酪酸。與正常大鼠相比，模型大鼠腸道菌群代謝途徑類似，但各種代謝產(chǎn)物的含量較低，原型化合物含量較高。此外，去葡萄糖基和去咖啡?；饔梅謩e是環(huán)烯醚萜苷與毛蕊花糖苷的腸道菌群主要代謝途徑。
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7、.山茱萸-熟地黃藥對的體內(nèi)過程研究
　　采用UPLC-MS技術(shù)，同時檢測馬錢苷、莫諾苷、梓醇和毛蕊花糖苷在正常與慢性腎炎模型大鼠體內(nèi)的動態(tài)含量，同時分析了大鼠血漿、尿液和糞便中主要活性成分及其代謝物。并采用Caco-2細胞模型考察了山茱萸-熟地黃的人腸道菌群代謝物的跨膜能力。
　　藥代動力學(xué)結(jié)果表明，單味藥配伍后，各活性成分的t1/2、AUC0→t、AUC0-∞增大，CLz/F降低;與正常大鼠相比，在模型大鼠體內(nèi)AUC0-t

8、、AUC0-∞、Cmax增大，CLz/F降低，提示原成分的生物利用度增加、藥效延長。檢測大鼠體內(nèi)代謝物顯示:活性成分在大鼠體內(nèi)可發(fā)生硫酸結(jié)合、葡萄糖醛酸結(jié)合、甲基化和氫化等反應(yīng)。配伍以后體內(nèi)可能的代謝產(chǎn)物種類和含量均降低。病理條件下，原型化合物含量增加，代謝產(chǎn)物含量減少。Caco-2細胞實驗表明，山茱萸的腸道菌群代謝物馬錢素、氫化馬錢素、去羥基莫諾苷苷元可透過細胞膜，熟地黃可透膜的腸道菌群代謝物主要包括氫化梓醇苷元、咖啡酸、甲基咖啡酸、

9、羥基酪酸。藥對可透膜的代謝物種類與單味藥相似，但代謝物含量較低。
　　綜上所述，山茱萸、熟地黃的腸道菌群代謝與其治療慢性腎炎的功能密切相關(guān)。一方面，腸道菌群代謝活性成分影響藥物的吸收;另一方面，藥物提取液口服后可促進腸道中有益菌的生長并抑制有害菌的生長，從而降低機體內(nèi)炎癥因子含量，減輕慢性腎炎患者炎癥癥狀。本研究為山茱萸-熟地黃藥對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、體內(nèi)吸收、微生物代謝機制、生物利用度等相關(guān)研究奠定了重要基礎(chǔ)，為臨床合理用藥提供了重要