應用酵母單雜交技術篩選柿DkPDC2互作轉錄因子的研究.pdf

1、完全甜柿自然脫澀存在兩種機理，分別為“稀釋效應”和“凝固效應”。日本原產(chǎn)完全甜柿（日本甜柿）以“稀釋效應”為主，而中國原產(chǎn)完全甜柿（中國甜柿）既有“稀釋效應”又有“凝固效應”，而“凝固效應”可能在中國甜柿自然脫澀中具有更重要的作用。已有研究表明，DkPDC2是乙醛代謝途徑中的關鍵基因，而乙醛與可溶性單寧結合形成不溶性單寧，但其調控機制尚不完全清楚。本試驗以中國甜柿‘羅田甜柿’為研究試材，通過酵母單雜交cDNA文庫篩選和互作分析，以期獲得

2、調控DkPDC2的轉錄因子與其影響中國甜柿自然脫澀的分子機制。
　　主要研究結果如下。
　　1.通過酵母文庫篩選獲得候選轉錄因子，將其命名為DkMYB9。通過酵母單雜試驗和雙熒光素酶試驗，驗證候選轉錄因子DkMYB9可以激活DkPDC2啟動子活性，表明DkMYB9與DkPDC2存在相互作用。
　　2.聚類分析發(fā)現(xiàn)候選轉錄因子DkMYB9與擬南芥MYB家族中具有抑制花青素合成功能的AtMYB3和AtMYB4等聚為一類;氨

3、基酸序列比對分析，結果顯示候選轉錄因子DkMYB9具有R2R3結構域和MYB-bHLH相互結合基序。不同脫澀類型柿品種中DkMYB9和DkPDC2表達模式分析，結果顯示DkMYB9和DkPDC2在不同脫澀類型柿品種中表達模式相似。
　　3.利用農(nóng)桿菌介導的柿組培苗真空滲透法，瞬時超表達DkMYB9后，葉片可溶性單寧含量明顯下降;qRT-PCR分析，結果表明原花青素生物合成途徑相關基因下調表達，而乙醛生物合成途徑相關基因上調表達。<