siRNA介導(dǎo)的NK細胞KIR2DL3受體抑制對人肝星狀細胞的影響分析.pdf

1、目的：
　　通過特異性沉默NK細胞KIR2DL3受體表達，分析抑制性受體KIR2DL3與NK細胞活性相關(guān)性；沉默后NK細胞與人HSCs細胞系LX-2細胞株共同培養(yǎng)，分析抑制KIR2DL3受體的表達后，NK細胞對活化的人HSCs凋亡的影響是否發(fā)生改變。以期深入認識N K細胞抑制慢性HC V感染者肝纖維化的分子機制。
　　方法：
　　取隨機抽取的48例健康漢族人及10例慢性HCV感染患者外周血樣本，進行NK細胞分離，鑒定N

2、K細胞KIR2DL2及KIR2DL3基因型，分析并分選出攜帶KIR2DL3基因的樣本個體。利用RNAi技術(shù),將ShRNA片段插入PLKO.1載體中，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染到293T細胞，收集上清中的慢病毒，將慢病毒與 NK細胞共同孵育，以特異性 siRNA沉默 KIR2DL3的基因表達。siRNA轉(zhuǎn)染后的NK細胞與人HSCs細胞系LX-2細胞株共同培養(yǎng)，分析特異性siRNA沉默KIR2DL3基因，抑制KIR2DL3受體的表達后

3、，NK細胞對活化的人HSCs凋亡的影響是否發(fā)生改變，分析NK細胞的抗肝纖維化作用的分子機制。
　　結(jié)果：
　　我們發(fā)現(xiàn)58例樣本中，KIR2DL3、KIR2DL2等位基因以KIR2DL3-2DL3純合子形式為常見，KIR2DL3基因型占總樣本量的96.6％。此外，我們分析運用RNA干擾技術(shù)可實現(xiàn)對KIR2DL3基因的沉默。以siRNA轉(zhuǎn)染后的NK細胞與人HSCs細胞系LX-2細胞株共同培養(yǎng)，檢測 LX-2細胞凋亡情況。我們發(fā)