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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:觀察局灶節(jié)段性腎小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,F(xiàn)SGS)大鼠模型中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá)以及清利湯干預(yù)后對(duì)其表達(dá)的影響,探索治療FSGS的新靶點(diǎn)。
方法:采用一側(cè)腎臟切除加分次尾靜脈注射阿霉素(分別為5mg/kg和3mg/kg)法成功建立FSGS大鼠模型。50只健康雄性SD大鼠隨機(jī)均分為5組
2、,正常對(duì)照組(NC組,n=10)、模型組(FSGS組,n=10)、貝那普利治療組(B組,n=10)、清利湯治療組(QL組,n=10)、中西藥治療組(B+QL組,n=10)。在造模后第8周末給予相應(yīng)貝那普利片、中藥清利湯、貝那普利合清利湯干預(yù),持續(xù)灌胃6周;作為對(duì)照,正常組與模型組予以同劑量生理鹽水。分別于第0周、第4周、第8周、第14周末代謝籠收集24h尿液,用于檢測(cè)24h尿蛋白。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前,各組大鼠心臟取血檢測(cè)血肌酐(serum cr
3、eatinine,Scr)、尿素氮(ureanitrogen,BUN)、總蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,Alb)水平;采用HE和Masson染色觀察腎臟組織病理變化;Western印跡法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別檢測(cè)大鼠腎臟組織VEGF(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)、α-SMA(α-平滑肌肌動(dòng)蛋白)的蛋白及mRNA表達(dá)情況。
結(jié)果:
1.24小時(shí)尿蛋白:造模組(包括FSGS組、B組、QL組和
4、B+QL組),在第4周和第8周時(shí)尿蛋白排泄量較NC組上升顯著,F(xiàn)SGS組在第14周時(shí)達(dá)到高峰(P<0.01);藥物干預(yù)后,14周末B組、QL組及B+QL組較FSGS組,可見(jiàn)24h尿蛋白明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);且藥物干預(yù)組(B組、QL組及B+QL組)14周尿蛋白較同組第4周、第8周,均有減少,與第8周相比尤為顯著。B組、QL組及B+QL組治療組之間無(wú)明顯差別。
2.血清指標(biāo)
2.1 腎功能:與NC組
5、相比,F(xiàn)SGS組血清Scr、BUN明顯升高(P<0.01);經(jīng)藥物干預(yù)后,B組、QL組及B+QL組,上述指標(biāo)均有下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尤其是B+QL組,下降尤為顯著(P<0.01)。各個(gè)治療組別之間無(wú)顯著差異。
2.2 總蛋白、白蛋白:與NC組相比,F(xiàn)SGS組血清TP、Alb明顯下降(P<0.01);藥物作用后,B組、QL組及B+QL組,上述指標(biāo)均有提高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尤其是B+QL組,上升尤為顯著(P<0.01)。
6、各個(gè)治療組別之間無(wú)顯著差異。
3.HE和Masson染色:顯示FSGS組腎小球毛細(xì)血管袢塌陷,腎小球數(shù)目減少伴硬化,腎小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡樣變性,很大一部分腎小管管腔可見(jiàn)擴(kuò)張,間質(zhì)纖維組織有增生現(xiàn)象,膠原成分顯著增加。B組、QL組及B+QL組大鼠腎臟形態(tài)學(xué)損傷較FSGS組減輕,腎小球硬化、腎小管擴(kuò)張、膠原成分等情況好轉(zhuǎn)。
4.VEGF、α-SMA的蛋白及mRNA表達(dá):與NC組相比,F(xiàn)SGS組大鼠腎組織VEGF、α-
7、SMA蛋白及mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01);經(jīng)藥物干預(yù)后,B組、QL組及B+QL組,上述指標(biāo)的表達(dá)減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,尤其是B+QL組,下降尤為明顯(P<0.01),但仍高于正常組。各個(gè)治療組別之間無(wú)顯著差異。
結(jié)論:
1.采用一側(cè)腎臟切除術(shù)后二次注射阿霉素法,可成功建立局灶節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)模型。
2.FSGS大鼠VEGF的蛋白及mRNA水平顯著上升,提示VEGF可能參與了腎臟的纖維
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