坎地沙坦對腦缺血再灌注大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察坎地沙坦對腦缺血再灌注大鼠血清及腦組織SOD、MDA、CAT、GSH-Px、NO、NOS的影響，對腦組織8-OHdG、4-HNE的影響以及對腦皮質(zhì)NADPH氧化酶p22-phox、p47-phox、gp91-phox的影響，探討其對腦缺血抗氧化作用及其作用機(jī)制。
　　方法：144只SD大鼠，隨機(jī)分為正常組（假手術(shù)組）、腦缺血再灌注模型組、坎地沙坦小劑量組(0.2mg/(kg.d))、坎地沙坦大劑量組(1mg/(kg.d)

2、）。每組36只，每組再隨機(jī)分為24h亞組、72h亞組，每組18只。正常組和模型組給予生理鹽水(0.9％NS)1ml/d灌胃，坎地沙坦小劑量組給予坎地沙坦0.2mg/（kg.d）灌胃，坎地沙坦大劑量組給予坎地沙坦1mg/（kg.d）灌胃。2周后采用雙側(cè)頸總動脈夾閉法夾閉頸總動脈，缺血2小時后拔除動脈夾實(shí)現(xiàn)再灌注損傷，制備腦缺血再灌注大鼠模型，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計的不同時間節(jié)點(diǎn)，各組選取6只大鼠，在再灌注24h或72h時斷頭取腦，行TTC染色并測定

3、腦梗死面積;各組另選取6只大鼠禁食過夜、稱重、以3％戊巴比妥鈉(0.15ml/100g)麻醉，腹主動脈取血，以低溫離心分離血清，處死后取腦組織制作10％腦組織勻漿，以低溫離心分離取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清、腦組織勻漿中的SOD、MDA、CAT、GSH-Px水平、采用硝酸還原酶法檢測血清及腦組織中NO、NOS水平，同時取部分腦組織凍存以RT-PCR法檢測腦組織中NADPH氧化酶亞基p22-phox、p47-phox

4、、gp91-phox的表達(dá)情況;各組余下大鼠麻醉并采用4％多聚甲醛灌注固定，斷頭取腦組織包埋切片，行HE染色于光鏡下觀察海馬CA1區(qū)其病理學(xué)變化和神經(jīng)元凋亡情況，免疫組化法觀察8-OHdG與4-HNE的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、TTC染色結(jié)果顯示，正常組TTC染色未見白色，無腦梗死區(qū)域。與模型組相比，坎地沙坦小劑量24h組、72h組和坎地沙坦大劑量24h組、72h組腦梗死面積明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與坎地沙坦大

5、劑量24h組、坎地沙坦大劑量72h組相比，坎地沙坦小劑量24h組、坎地沙坦小劑量72h組腦梗死面積略大，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。大鼠血清及腦組織SOD、MDA、CAT、GSH-Px、NO、NOS水平測定結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組血清及腦組織SOD、CAT、GSH-Px水平明顯減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比，坎地沙坦小劑量24h組及72h組、坎地沙坦大劑量24h組及72h組血清及腦組織SOD、CAT、

6、GSH-Px水平均明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與正常組相比，模型組血清及腦組織MDA、NO、NOS水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比，坎地沙坦小劑量24h組及72h組、坎地沙坦大劑量24h組及72h組血清及腦組織MDA、NO、NOS水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。光鏡下觀察海馬CA1區(qū)HE染色結(jié)果顯示，正常組組織染色均勻，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰;模型組細(xì)胞密度降低，結(jié)構(gòu)排列紊亂，細(xì)胞形

7、狀不規(guī)則，細(xì)胞核出現(xiàn)變形、固縮、甚至溶解;坎地沙坦小劑量24h組及72h組、坎地沙坦大劑量24h組及72h組組織結(jié)構(gòu)稀疏，少量細(xì)胞核出現(xiàn)變形、固縮。免疫組化結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組8-OHdG與4-HNE免疫陽性細(xì)胞數(shù)增加明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比，坎地沙坦小劑量24h組及72h組、坎地沙坦大劑量24h組及72h組8-OHdG與4-HNE免疫陽性細(xì)胞數(shù)減少明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2、RT-

8、PCR檢測結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組p22-phox、p47-phox、gp91-phox的表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);與模型組相比，坎地沙坦小劑量24h組及72h組、坎地沙坦大劑量24h組及72h組p22-phox、p47phox、gp91-phox的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：坎地沙坦可明顯減少腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積;降低血清及腦組織MDA、NO、NOS、8-OHdG