果蠅Rgn蛋白多克隆抗體制備及其在天然免疫中的作用.pdf

1、天然免疫作為多細胞生物阻止外界微生物入侵的第一道防線，在機體防御機制中具有十分重要的作用。與哺乳動物相比，黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）的天然免疫系統(tǒng)沒有與之相似的B淋巴細胞及T淋巴細胞，也沒有能夠專一識別病原微生物的特異性免疫系統(tǒng)，但其能夠對微生物感染迅速而有效地應答，說明果蠅具有能夠抵抗病原微生物入侵的高效的固有免疫系統(tǒng)。日前的研究結果表明，果蠅體內存在著三種主要的天然免疫方式:分別是通過脂肪體產生的抗菌

2、肽來達到防御目的體液免疫，依靠漿細胞吞噬和包裹作用的細胞免疫，以及通過產生的黑色素沉積在傷口并殺傷病原體的黑化反應。
　　再生蛋白(Regeneration，Rgn)是C型凝集素(C-type lectin)超家族成員之一，由一段信號序列和C型鈣離子依賴性凝集素結構域(C-type Ca2+-dependent lectindomain，CTLD)組成，是rgn基因的編碼產物。研究表明，Rgn蛋白對于個體發(fā)育、組織再生和創(chuàng)傷修復具

3、有重要作用。其參與果蠅生長發(fā)育的各階段，是果蠅生長發(fā)育中不可或缺的重要蛋白之一。因Rgn蛋白在果蠅生長發(fā)育中的重要作用以及rgn基因所含有的特殊的C型凝集素結構域，推測其可能也參與了果蠅的天然免疫反應。本實驗通過比較野生型WT(w1118)與rgn缺陷型果蠅（gnRNAi）腹腔注射白假絲酵母菌孢子后生存率的變化認識到由于Rgn蛋白的缺失，造成機體抵御真菌的能力明顯減弱;血細胞含量的比較實驗中出現血細胞數量明顯升高的現象;此外，在生長狀態(tài)

4、的比較中也觀察到了全身低表達蛹期致死及翅原基低表達導致翅脈異常發(fā)育的現象。這都說明由于Rgn蛋白的缺失導致果蠅機體出現了部分天然免疫功能的改變。同時本實驗對rgn缺陷型果蠅細胞的吞噬能力、細胞膜肌動蛋白延展性以及創(chuàng)傷引起的黑化反應能力進行探究，與對照相比未出現明顯變化。
　　此外通過制備Rgn蛋白的多克隆抗體將從蛋白水平對Rgn蛋白進行檢測，能夠更加直接、準確的揭示其細胞定位及表達情況，為研究果蠅Rgn蛋白的生物學功能提供研究基礎