DNA免疫法制備抗小鼠TIGIT多克隆抗體及其功能鑒定.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、[目的]：利用DNA免疫法制備抗小鼠TIGIT多克隆抗體。
　　[方法]：運(yùn)用生物信息學(xué)方法從基因數(shù)據(jù)庫(kù)(GenBank)獲取小鼠TIGIT基因序列,利用RT-PCR技術(shù)以小鼠脾臟cDNA為模板得到TIGIT基因片段,再利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增出TIGIT編碼區(qū)的基因片段,并連接至pcDNA3.1(+)真核表達(dá)載體。運(yùn)用基因克隆技術(shù)構(gòu)建TIGIT-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒。測(cè)序無(wú)誤后,將TIGIT-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒大量擴(kuò)

2、增,提取,純化。然后,通過(guò)股四頭肌肌內(nèi)注射分別于D0、D14和D28天免疫SD大鼠(100μg/只),最后一次免疫后10天收獲血清。利用蛋白A+G瓊脂糖珠親和層析法純化抗血清得到多克隆抗體,最后,通過(guò)westernblot和免疫組化技術(shù)鑒定其特異性。
　　[結(jié)果]：成功免疫SD大鼠,westernblot顯示于26Kd處可見(jiàn)明顯的蛋白條帶,與小鼠mTIGIT預(yù)測(cè)分子量相符,此結(jié)果證實(shí)制備的抗體可以與正常小鼠心、肝、脾、腎臟組織中表

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