miR-203通過TLR4調(diào)控白念珠菌刺激的樹突狀細胞合成IL-6和TNF-α.pdf

1、第一部分 單核源性樹突狀細胞接受熱滅活白念珠菌刺激后microRNA表達譜的改變：本部分實驗采用microRNA 芯片分析了接受熱滅活白念珠菌刺激后的單核源性樹突狀細胞microRNA表達譜的改變，并進行了生物信息學分析。結(jié)果表明：有62個microRNA在熱滅活白念珠菌刺激后表達上調(diào)，有4個microRNA在熱滅活白念珠菌刺激后表達下調(diào)。我們對表達發(fā)生變化的microRNA 進行了Gene Ontology、pathway、調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和

2、轉(zhuǎn)錄因子分析，并結(jié)合文獻，從中挑選出miR-203作為研究對象。
　　 第二部分 miR-203 負向調(diào)控熱滅活白念珠菌誘導的單核源性樹突狀細胞表達IL-6和TNF-α:在本部分研究中，我們首先采用RT-PCR 法證實了芯片檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)熱滅活白念珠菌可以通過TLR4，而非Dectin-1誘導單核源性樹突狀細胞表達miR-203。同時，我們還發(fā)現(xiàn)，熱滅活白念珠菌可以通過TLR4和Dectin-1誘導單核源性樹突狀細胞表達炎癥因子

3、IL-6和TNF-α。為研究熱滅活白念珠菌誘導單核源性樹突狀細胞表達miR-203的生物學意義，我們采用“gain-and loss-of-function”的研究手段，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-203 可以負向調(diào)節(jié)IL-6和TNF-α的產(chǎn)生。這些結(jié)果表明：熱滅活變念珠菌誘導單核源性樹突狀細胞表達miR-203的生物學意義在于負向調(diào)控炎癥介質(zhì)IL-6和TNF-α的產(chǎn)生，抑制炎癥反應(yīng)的強度。
　　 第三部分TLR4是miR-203的作用靶點

4、:我們首先采用生物信息學軟件預(yù)測除了與白念珠菌免疫識別密切相關(guān)的模式識別受體TLR4是miR-203的作用靶點之一。然后我們通過報告基因技術(shù)，證實了TLR4 mRNA的3’UTR 可以與miR-203 發(fā)生相互作用。最后我們將miR-203 mimics和miR-203 inhibitor 轉(zhuǎn)染入單核源性樹突狀細胞，并采用熱滅活白念珠菌進行刺激。結(jié)果發(fā)現(xiàn)白念珠菌刺激單核源性樹突狀細胞可以引起其表面的TLR4表達逐漸降低，與miR-203

5、的變化趨勢剛好相反，而轉(zhuǎn)染miR-203 mimics 可以加速TLR4的表達下調(diào)，而轉(zhuǎn)染miR-203 inhibitor 則可以部分緩解TLR4的表達下調(diào)趨勢。這些結(jié)果表明：在單核源性樹突狀細胞中，TLR4是miR-203的作用靶點。
　　 第四部分 siRNA 沉默單核源性樹突狀細胞TLR4的表達:可以削弱熱滅活白念珠菌誘導TNF-α和IL-6表達的能力，但并不抑制miR-203的表達為研究樹突狀細胞中miR-203 抑制