miR-203通過(guò)TLR4調(diào)控白念珠菌刺激的樹(shù)突狀細(xì)胞合成IL-6和TNF-α.pdf_第1頁(yè)
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1、第一部分 單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞接受熱滅活白念珠菌刺激后microRNA表達(dá)譜的改變:本部分實(shí)驗(yàn)采用microRNA 芯片分析了接受熱滅活白念珠菌刺激后的單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的改變,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:有62個(gè)microRNA在熱滅活白念珠菌刺激后表達(dá)上調(diào),有4個(gè)microRNA在熱滅活白念珠菌刺激后表達(dá)下調(diào)。我們對(duì)表達(dá)發(fā)生變化的microRNA 進(jìn)行了Gene Ontology、pathway、調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和

2、轉(zhuǎn)錄因子分析,并結(jié)合文獻(xiàn),從中挑選出miR-203作為研究對(duì)象。
   第二部分 miR-203 負(fù)向調(diào)控?zé)釡缁畎啄钪榫T導(dǎo)的單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)IL-6和TNF-α:在本部分研究中,我們首先采用RT-PCR 法證實(shí)了芯片檢測(cè)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)熱滅活白念珠菌可以通過(guò)TLR4,而非Dectin-1誘導(dǎo)單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)miR-203。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn),熱滅活白念珠菌可以通過(guò)TLR4和Dectin-1誘導(dǎo)單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)炎癥因子

3、IL-6和TNF-α。為研究熱滅活白念珠菌誘導(dǎo)單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)miR-203的生物學(xué)意義,我們采用“gain-and loss-of-function”的研究手段,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-203 可以負(fù)向調(diào)節(jié)IL-6和TNF-α的產(chǎn)生。這些結(jié)果表明:熱滅活變念珠菌誘導(dǎo)單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)miR-203的生物學(xué)意義在于負(fù)向調(diào)控炎癥介質(zhì)IL-6和TNF-α的產(chǎn)生,抑制炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度。
   第三部分TLR4是miR-203的作用靶點(diǎn)

4、:我們首先采用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)除了與白念珠菌免疫識(shí)別密切相關(guān)的模式識(shí)別受體TLR4是miR-203的作用靶點(diǎn)之一。然后我們通過(guò)報(bào)告基因技術(shù),證實(shí)了TLR4 mRNA的3’UTR 可以與miR-203 發(fā)生相互作用。最后我們將miR-203 mimics和miR-203 inhibitor 轉(zhuǎn)染入單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞,并采用熱滅活白念珠菌進(jìn)行刺激。結(jié)果發(fā)現(xiàn)白念珠菌刺激單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞可以引起其表面的TLR4表達(dá)逐漸降低,與miR-203

5、的變化趨勢(shì)剛好相反,而轉(zhuǎn)染miR-203 mimics 可以加速TLR4的表達(dá)下調(diào),而轉(zhuǎn)染miR-203 inhibitor 則可以部分緩解TLR4的表達(dá)下調(diào)趨勢(shì)。這些結(jié)果表明:在單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞中,TLR4是miR-203的作用靶點(diǎn)。
   第四部分 siRNA 沉默單核源性樹(shù)突狀細(xì)胞TLR4的表達(dá):可以削弱熱滅活白念珠菌誘導(dǎo)TNF-α和IL-6表達(dá)的能力,但并不抑制miR-203的表達(dá)為研究樹(shù)突狀細(xì)胞中miR-203 抑制

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