MicroRNA223通過靶向STAT3調(diào)控Toll樣受體觸發(fā)的巨噬細胞IL-6和IL-1β的分泌.pdf

1、Toll樣受體(TLRs)通過識別表達在細菌、病毒和真菌組成物上的病原體相關(guān)分子模式，啟動宿主抗感染的天然免疫反應(yīng)，產(chǎn)生白細胞介素6(IL-6)，IL-1β和腫瘤壞死因子(TNF-α)等促炎因子。多功能性細胞因子IL-6的表達在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，其表達的調(diào)控方式和機制受到廣泛關(guān)注和研究。盡管在IL-6表達的信號轉(zhuǎn)導途徑以及轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機制已有較多報道，但目前關(guān)于microRNAs調(diào)控IL-6表達的研究報道卻知之甚少。microR

2、NAs為近年來發(fā)現(xiàn)的一類小分子非編碼RNA，它在包括免疫應(yīng)答在內(nèi)的許多生物學過程中均發(fā)揮重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控功能，包括TLR信號活化后的炎癥應(yīng)答。microRNA 223(miR-223)是一種在髓系細胞中特異高表達的一種miRNA，目前對于miR-223的研究多集中在粒細胞中，其能負向調(diào)控粒細胞的增殖分化以及活化。但是目前對于miR-223在TLR信號中是否發(fā)揮作用還未有研究。
　　 我們發(fā)現(xiàn)，用TLR3和TLR4的配體LPS，p

3、olyI：C刺激小鼠巨噬細胞系RAW264.7或原代培養(yǎng)的巨噬細胞，熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示LPS，polyI：C刺激后巨噬細胞中miR-223的表達水平發(fā)生顯著下調(diào)。用miR-223 mimics進行功能研究發(fā)現(xiàn)，miR-223的過表達可明顯抑制LPS誘導的巨噬細胞IL-6和IL-1β的mRNA和蛋白表達水平，但不影響TNF-α的分泌水平。對TLR4活化后的相關(guān)信號途徑的檢測發(fā)現(xiàn)，miR-223對IκBα，ERK或P38的磷酸化沒有

4、影響，而對STAT3的總蛋白及磷酸化水平有顯著的負向調(diào)控作用。由于miRNA主要通過調(diào)控其靶基因的表達進而發(fā)揮生物學功能，進一步的熒光素酶報告基因試驗及STAT3 siRNA等實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-223可以直接靶向抑制STAT3的表達，而STAT3可促進TLR4觸發(fā)的巨噬細胞IL-6和IL-1β的分泌，但不影響TNF-α的水平。更有趣的是，在尋找TLR4活化后誘導miR-223下調(diào)的因素時，我們發(fā)現(xiàn)IL-6是一個可以促進miR-223下

5、調(diào)的因子，在TLR4活化的巨噬細胞中用IL-6的中和抗體可阻斷這種作用。提示，IL-6可以通過下調(diào)miR-223的表達，從而釋放對STAT3的抑制，由此形成一個對TLR4觸發(fā)的促炎因子應(yīng)答的正反饋調(diào)控環(huán)路，從而促進IL-6自身的分泌。因此，本研究結(jié)果顯示，miR-223可通過在轉(zhuǎn)錄后水平抑制STAT3，從而促進TLR觸發(fā)的天然免疫細胞活化后IL-6的表達，進而調(diào)控免疫應(yīng)答。
　　 上述結(jié)果可為揭示IL-6/miR-223/STA