選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑對(duì)2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝炎保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：
　　 非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)正逐漸發(fā)展成為全球最常見(jiàn)的慢性肝臟病變。炎癥反應(yīng)能促進(jìn)NAFLD的發(fā)生發(fā)展。近年來(lái)，環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COx-2)與NAFLD的關(guān)系得到關(guān)注，能否利用COX-2抑制劑來(lái)治療NAFLD成為研究熱點(diǎn)。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-γ(peroxisomeproliferation activat

2、or receptor-γ，PPARγ)可能通過(guò)與COX-2相互作用，參與到非酒精性脂肪肝病的發(fā)病過(guò)程中，且已有研究表明部分選擇性COX-2抑制劑具有激活PPARγ的作用。本文旨在探討選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布(celecoxib)對(duì)2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)的保護(hù)作用以及其對(duì)PPARγ的激活作用。
　　 方法：
　　 建立2型糖尿病大鼠N

3、ASH模型，應(yīng)用選擇性COX-2抑制劑進(jìn)行干預(yù)治療。實(shí)驗(yàn)對(duì)象分為4組:①對(duì)照組;②對(duì)照+celecoxib組;③模型組;④模型+celecoxib組。造模后收集大鼠血清和肝臟標(biāo)本。利用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平。肝組織HE染色和NAFLD活動(dòng)度評(píng)分(NAFLDactivity scores，NAS)以評(píng)估肝臟脂肪性炎癥程度。肝組織油紅O染色以及肝內(nèi)甘油三酯和膽固醇含量測(cè)定以評(píng)價(jià)肝內(nèi)脂質(zhì)聚集情況

4、。分別通過(guò)免疫組織化學(xué)染色方法、Western blot方法、Real-time PCR方法檢測(cè)celecoxib對(duì)COX-2、PPARγ蛋白以及mRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、塞來(lái)昔布具有抑制肝臟炎癥和脂質(zhì)聚集的作用
　　 在①至④組中，血清ALT水平分別為(33.00±4.06)U/L，(36.8±2.39)U/L，(301.80±5.40)U/L，(88.80±13.07)U/L;血清AST水

5、平分別為(76.6±7.64)U/L,(80.2±6.42)U/L，(345.40±9.63)U/L，(99.80±20.51)U/L，統(tǒng)計(jì)分析表明模型組ALT和AST水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.01);模型+celecoxib組ALT和AST水平顯著低于模型組(P＜0.01)。肝臟HE染色顯示模型組、模型+celecoxib組均有不同程度的肝臟脂肪性炎癥。①至④組NAS評(píng)分為NAS:(0.8±0.45)，(1±0.71)，(3.8±0

6、.45)，(6.2±0.45)，統(tǒng)計(jì)分析表明模型+celecoxib組NAS明顯弱于模型組(P＜0.01)。模型組肝內(nèi)甘油三酯水平(162.79±7.05)mg/ml顯著高于對(duì)照組(95.22±4.63)mg/ml(P＜0.01)、對(duì)照+celecoxib組(93.47±5.41)mg/ml(P＜0.01)、模型+celecoxib組(120.11±9.82)mg/ml(P＜0.01)。模型組肝內(nèi)膽固醇水平(186.25±13.19)m

7、g/ml顯著高于對(duì)照組(73.67±4.40)mg/ml(P＜0.01)、對(duì)照+celecoxib組(75.44±4.03)mg/ml(P＜0.01)、模型+celecoxib組(114.51±10.60)mg/ml(P＜0.01)。
　　 2、塞來(lái)昔布抑制2型糖尿病大鼠NASH肝臟中COX-2蛋白和mRNA表達(dá)
　　 免疫組化結(jié)果表明COX-2在對(duì)照組、對(duì)照+celecoxib組、模型組、模型+celecoxib組中陽(yáng)

8、性細(xì)胞率分別為（5.74±0.23）％、（5.65±2.18）％、(53.12±0.93)％、(31.44±0.99)％;Western blot結(jié)果顯示COX-2在對(duì)照組、對(duì)照+celecoxib組、模型組、模型+celecoxib組的蛋白表達(dá)倍數(shù)分別為(1.00±0.15)、(1.07±0.10)、(3.04±0.23)、(1.26±0.11); Real-time PCR結(jié)果顯示COX-2在對(duì)照組、對(duì)照+celecoxib組、模型

9、組、模型+celecoxib組的mRNA表達(dá)倍數(shù)分別為(1.14±0.32)、(1.05±0.27)、(5.11±0.53)、（2.57±0.40）;統(tǒng)計(jì)分析表明模型組COX-2陽(yáng)性細(xì)胞率、蛋白、mRNA表達(dá)水平倍數(shù)顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)和對(duì)照+celecoxib組(P＜0.01)，celecoxib能顯著抑制2型糖尿病大鼠NASH肝臟中COX-2表達(dá)(P＜0.01)。
　　 3、塞來(lái)昔布促進(jìn)2型糖尿病大鼠NASH肝臟中

10、PPARγ蛋白和mRNA表達(dá)
　　 Western blot結(jié)果顯示PPARγ在對(duì)照組、對(duì)照+celecoxib組、模型組、模型+celecoxib組的蛋白表達(dá)倍數(shù)分別為(1.00±0.15)、(1.06±0.11)、(0.37±0.03)、(0.86±0.08); Real-time PCR結(jié)果顯示PPARγ在對(duì)照組、對(duì)照+celecoxib組、模型組、模型+celecoxib組的mRNA表達(dá)倍數(shù)分別為(1.07±0.45)、

11、(1.04±0.32)、(0.24±0.16)、(0.72±0.33);統(tǒng)計(jì)分析表明模型組PPARγ蛋白、mRNA表達(dá)水平倍數(shù)顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)和對(duì)照+celecoxib組(P＜0.01)，celecoxib能顯著促進(jìn)2型糖尿病大鼠NASH肝臟中PPARγ表達(dá)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、選擇性COX-2抑制劑塞來(lái)昔布對(duì)2型糖尿病大鼠NASH具有保護(hù)作用。
　　 2、塞來(lái)昔布抑制肝臟脂肪