益氣養(yǎng)陰活血方對(duì)放射性肺纖維化作用通路的研究.pdf

1、目的：胸部惡性腫瘤經(jīng)放療后不可避免的會(huì)造成放射性肺損傷，放射性肺損傷后期以放射性肺纖維化為主。放射性肺纖維化一旦形成，過程很難逆轉(zhuǎn)，其預(yù)防重于治療。本課題組前期實(shí)驗(yàn)研究表明：益氣養(yǎng)陰活血方干預(yù)放射性肺纖維化大鼠模型后，大鼠出現(xiàn)纖維化的時(shí)間較晚，程度較輕；益氣養(yǎng)陰活血方切中放射性肺纖維化期的氣陰兩虛，血脈瘀滯的病機(jī)特點(diǎn)，對(duì)放射性肺纖維化有防治作用。本研究將從基因與蛋白的層面，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)(RT-PCR)及蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Wes

2、tern-Blot)檢測(cè)放射性肺纖維化大鼠肺組織中相關(guān)因子，進(jìn)一步明確益氣養(yǎng)陰活血方防治放射性肺纖維化的作用通路，為臨床應(yīng)用益氣養(yǎng)陰活血方防治放射性肺纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：前期實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了小劑量多次照射(經(jīng)背部照射右肺，每周兩次，每次3Gy，劑量率0.8Gy/min，均勻率95％，照射時(shí)間225秒，連照5周，累計(jì)照射劑量達(dá)30Gy）的放射性肺纖維化大鼠模型。將大鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組(A組)、單純照射組(B組)和益氣養(yǎng)陰活血

3、組(C組)3組，每組各20只。益氣養(yǎng)陰活血方由黃芪、人參、當(dāng)歸、莪術(shù)、三棱、紅景天、五味子、麥冬、紫菀及甘草組成。照射開始時(shí)同期灌胃給藥，C組按14g/kg/d的劑量給藥，A組和B組大鼠同期每天給予1ml/100g生理鹽水灌胃。每周稱量體重，調(diào)整給藥量。照射開始后第26周處死大鼠，采集血清進(jìn)行液相微珠懸浮蛋白芯片檢測(cè)。芯片結(jié)果提示：益氣養(yǎng)陰活血組中IL-1β比單純照射組表達(dá)明顯下調(diào)。1.本研究在前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，通過大量的文獻(xiàn)學(xué)習(xí)，

4、篩選出了益氣養(yǎng)陰活血方防治放射性肺纖維化的可能作用通路為：TLR4/MyD88/NF-κB/IL-1β/TGFβ1；2.RT-PCR方法檢測(cè)TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和TGFβ1分別在空白對(duì)照組、單純照射組和益氣養(yǎng)陰活血組的基因表達(dá)情況。分別取前期實(shí)驗(yàn)中各組等量大鼠肺組織，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄制備cDNA，使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀進(jìn)行基因擴(kuò)增反應(yīng)，檢測(cè)各基因在各組的表達(dá)水平；3.WB方法分別檢測(cè)TLR4、MyD88、NF-

5、κB、IL-1β和 TGFβ1在空白對(duì)照組、單純照射組和益氣養(yǎng)陰活血組的蛋白表達(dá)情況。分別取前期實(shí)驗(yàn)中各組等量大鼠肺組織，提取蛋白并定量，進(jìn)行蛋白電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體雜交和發(fā)光檢測(cè)等步驟，確定各細(xì)胞因子在各組的蛋白表達(dá)水平；4.SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用單因素方差分析對(duì)組間均數(shù)進(jìn)行比較，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.單純照射組中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和

6、TGFβ1的基因表達(dá)水平明顯的高于空白對(duì)照組；益氣養(yǎng)陰活血組中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和TGFβ1的基因表達(dá)低于單純照射組的基因表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　2.單純照射組中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和TGFβ1的蛋白表達(dá)水平明顯的高于空白對(duì)照組；益氣養(yǎng)陰活血組中TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β和TGFβ1的蛋白表達(dá)水平與單純照射組相比下調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P