養(yǎng)陰清肺方對(duì)放射性肺損傷的臨床前研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察養(yǎng)陰清肺方對(duì)放射性肺損傷模型大鼠組織病理學(xué)及基質(zhì)金屬蛋白酶-12(MMP-12)、金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)等指標(biāo)的干預(yù)影響，探討?zhàn)B陰清肺方治療放射性肺損傷的作用機(jī)制，為該藥進(jìn)行臨床使用提供進(jìn)一步理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：取75只雄性Wistar大鼠，隨即分為空白對(duì)照組(A)、單純照射組(B)、養(yǎng)陰清肺方低劑量組(C，2g/kg·d)、養(yǎng)陰清肺方中劑量組(D，6g/kg·d)、養(yǎng)陰清肺方高劑量組(E，

2、18g/kg·d)，每組15只。用60Coγ射線單側(cè)照射大鼠右肺25Gy造模。A、B組于照射前一周至處死前給予生理鹽水，C、D、E組同時(shí)予相應(yīng)劑量中藥，均灌胃給藥，每日1次，以放射后第1周、第2周、第4周為觀察點(diǎn)，各組隨機(jī)抽取5只大鼠處死，以大鼠右肺大體觀察、肺系數(shù)、組織學(xué)改變；WesternBlot檢測(cè)MMP-12和TIMP-1的蛋白表達(dá)變化；rt-PCR檢測(cè)MMP-12、TIMP-1的mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、動(dòng)物一般

3、情況觀察，A組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中精神、活動(dòng)、進(jìn)食量、大便均無(wú)明顯異常表現(xiàn)。與A組比較，B組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，活動(dòng)減少，體重減輕，鼻周及眼角紅赤，大便發(fā)干，脫毛現(xiàn)象，及皮膚出現(xiàn)糜爛、潰瘍。與B組大鼠比較，C、D、E組上述癥狀較B組輕，皮膚無(wú)糜爛、潰瘍現(xiàn)象。中藥各劑量組之間比較，以D組癥狀最輕，E組大鼠出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。
　　2、肺臟大體情況觀察A組肺臟表面光滑，呈粉紅色，有光澤，彈性良好。B組照射后1周右肺顏色偏暗紅，大體形態(tài)無(wú)明顯變

4、化。照射后第2周右肺顏色暗紅加深，較左側(cè)肺腫脹。照射后第4周右肺腫脹明顯，顏色進(jìn)一步加深，并出現(xiàn)淤血點(diǎn)，肺臟表面可見(jiàn)白色結(jié)節(jié)樣改變，胸腔可見(jiàn)積液。C、D、E組大鼠右肺與B組比較，病變較輕。
　　3、病理組織學(xué)改變A組肺臟結(jié)構(gòu)正常，肺泡壁較薄，肺泡腔無(wú)滲出及積液。B組放射后第1周可見(jiàn)肺泡壁輕度水腫，毛細(xì)血管充血，肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)少量滲出及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間隔無(wú)明顯滲出、充血和水腫。照射后第2周肺泡間隔明顯增厚，可見(jiàn)大量巨噬細(xì)胞，部分肺泡結(jié)

5、構(gòu)消失。照射后第4周血管周圍大量巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等聚積，肺泡壁增厚，肺泡腔明顯萎陷乃至消失，部分肺泡腔代償擴(kuò)大，形成氣腫征，可見(jiàn)纖維細(xì)胞增生，局灶性纖維化。C、D、E組放射后第1周肺組織病理學(xué)改變主要表現(xiàn)為少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；照后第2周肺組織表現(xiàn)為炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、肺間隔增厚，C組炎癥表現(xiàn)與B組相仿，D、E組見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增厚較B組輕；照后第4周，C、D、E組大鼠肺組織學(xué)炎癥反應(yīng)及纖維化改變均明顯輕于B組。
　　4、大鼠肺組

6、織中MMP-12和TIMP-1的表達(dá)RT-PCR顯示：A、B、C、D、E組肺組織中均有MMP-12、TIMP-ιmRNA的表達(dá)。與A組相比，B組在照射后1周MMP-12、TIMP-ι基因轉(zhuǎn)錄水平均顯著增高，在照射后第4周時(shí)，MMP-12已有所降低，但TIMP-1mRNA表達(dá)仍持續(xù)性增高。與B組比較，C、D、E組各組在照射后MMP-12、TIMP-ι/mRNA基因轉(zhuǎn)錄水平均降低，但仍高于A組。
　　Western blot結(jié)果顯示：

7、A、B、C、D、E組肺組織中均有MMP-12、TIMP-1蛋白的表達(dá)，與A組比較，B組在照射后1周MMP-12、TIMP-1蛋白表達(dá)均顯著增高。與B組比較，中藥組各組MMP-12、TIMP-1蛋白表達(dá)水平均降低，但仍明顯高于A組。
　　結(jié)論1早期應(yīng)用養(yǎng)陰清肺方能減輕照射后肺組織的滲出性炎癥和間質(zhì)成纖維細(xì)胞的增生，對(duì)放射性肺損傷早期的間質(zhì)性肺炎具有明顯的對(duì)抗作用。
　　2養(yǎng)陰清肺方可抑制照射引起的大鼠肺組織中MMP-12、TI