布魯氏菌omp31、omp2b基因重組山羊痘病毒的構建及免疫原性初步研究.pdf

1、布魯氏菌?。˙rucellosis）是由胞內寄生的革蘭氏陰性菌布魯氏菌引起的一種人畜共患病，主要引起家畜死胎、流產(chǎn)、不孕等癥狀，不僅影響畜牧業(yè)的發(fā)展，還可導致巨大的經(jīng)濟損失和嚴重的公共衛(wèi)生問題。本研究以我國廣泛使用的山羊痘弱毒疫苗株為親本病毒，構建含布魯氏菌保護性抗原omp31和omp2b的重組山羊痘病毒，以期獲得針對布魯氏菌病的免疫性強的重組羊痘病毒，為布魯氏菌病、羊痘的預防提供理論基礎。 根據(jù)GenBank登錄的羊種布魯氏菌

2、omp31和omp2b基因序列，分別設計引物，PCR擴增得到omp31和omp2b基因，酶切、測序鑒定其正確性。將鑒定正確的omp31和omp2b基因克隆到GTPV（Goat poxvirus）重組載體pGM-TK-P11-GPT1上，構建含有布魯氏菌omp31和omp2b基因的重組山羊痘病毒轉移載體。將構建好的這兩個山羊痘病毒轉移載體與GTPV疫苗株G14-STV44-55共轉染綿羊睪丸細胞，篩選、鑒定重組病毒rGTPV株，并對該重組

3、病毒的細胞裂解物表達的OMP31和OMP2b蛋白進行Western blot檢測，利用間接ELISA來檢測rGTPV株免疫小鼠后其體內IgG抗體水平。 本實驗獲得了穩(wěn)定表達布魯氏菌OMP31和OMP2b蛋白的重組山羊痘病毒株G14-STV44-55-BOMP31和G14-STV44-55-BOMP2b；Western blot檢測表明重組山羊痘病毒表達的OMP31和OMP2b蛋白具有免疫反應性；rGTPV株免疫小鼠試驗表明該重組