硫化氫對(duì)腎血管性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈張力的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、硫化氫(Hydrogen sulfide，H2S)是繼一氧化氮(nitric oxide，NO)和一氧化碳(carbon monoxide，CO)之后發(fā)現(xiàn)的第三種新型內(nèi)源性氣體信號(hào)分子，可在體內(nèi)由胱硫醚-β-合酶(cystathionineβ-synthase，CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionineγ-lyase，CSE)和3-巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)換酶(3-mercaptopyruvate sulfur transferas

2、e，3-MST)催化而內(nèi)源性產(chǎn)生，在各系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。H2S在心血管系統(tǒng)的作用尤為突出，其可舒張血管、降低血壓、保護(hù)缺血心肌或缺血再灌損傷的心肌、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖等。高血壓為臨床常見病、多發(fā)病，嚴(yán)重影響著人類的身心健康，長(zhǎng)期的高血壓可使心肌梗死、中風(fēng)、慢性腎功能衰竭等疾病的發(fā)病率大大增加，所以高血壓的預(yù)防及治療逐漸成為研究熱點(diǎn)。腎血管性高血壓是指各種原因?qū)е碌哪I動(dòng)脈狹窄腎血流量減少，及腎臟缺血所引起的高血壓，是一種常見

3、的繼發(fā)性高血壓，可導(dǎo)致缺血性腎病及晚期腎臟病，危害著人類健康。腎血管性高血壓時(shí)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)活性增高，血漿血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)水平升高。已有研究表明AngⅡ通過受體發(fā)揮生物學(xué)作用，人體的血管平滑肌、腦的一些部位、心臟和腎臟器官的細(xì)胞上都存在血管緊張素Ⅱ受體，其中血管緊張素Ⅱ-1型受體(angiotensin type1 receptor，A

4、T1R)是介導(dǎo)AngⅡ生物學(xué)作用的主要受體，AngⅡ與AT1R結(jié)合，引起相應(yīng)的生理效應(yīng)：作用于血管平滑肌，使血管收縮，動(dòng)脈血壓升高；促進(jìn)醛固酮分泌、水鈉潴留；促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖、引起組織重構(gòu)等，導(dǎo)致血壓進(jìn)一步升高。H2S作為一種內(nèi)源性血管舒張因子，在高血壓形成的病理生理過程中起著重要的作用，已證實(shí)，內(nèi)源性硫化氫產(chǎn)生不足可導(dǎo)致高血壓。H2S的抗高血壓作用，與其劑量依賴性舒張血管平滑肌、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖而調(diào)節(jié)血管重構(gòu)等有關(guān)。有研究表明，

5、腎血管性高血壓大鼠血漿H2S含量和生成速率顯著降低，與H2S合成密切相關(guān)的CSE基因表達(dá)受到抑制，活性下降；當(dāng)給高血壓大鼠注射H2S供體硫氫化鈉(sodiumhydrosulfide，NaHS)后，血漿H2S的含量和生成速率以及CSE活性均明顯升高，血壓則顯著下降，而H2S是否可以降低腎血管性高血壓大鼠的動(dòng)脈血壓以及H2S對(duì)腎血管性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈張力的調(diào)節(jié)作用尚未見報(bào)道，本文旨在探討在腎血管性高血壓這種病理狀態(tài)下，慢性給予外源性H2

6、S供體NaHS對(duì)腎血管性高血壓大鼠胸主動(dòng)脈張力的調(diào)節(jié)作用及其可能機(jī)制。
　　目的：腎血管性高血壓的形成過程中，外源性給予NaHS，探討H2S的降壓作用及對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈張力的調(diào)節(jié)作用和可能的機(jī)制。
　　方法：7周齡的雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組(每組n=6)：假手術(shù)(sham)組，兩腎一夾(two-kidney-one-clip，2K1C)組，2K1C+NaHS組。其中2K1C+NaHS組，于兩腎一夾模型術(shù)后3天開始，每天腹腔注射

7、NaHS(56μmol/kg)；sham組及2K1C組注射相同劑量的生理鹽水。另設(shè)2K1C+卡托普利(2K1C+captopril)組每天腹腔注射卡托普利(5 mg/kg)，作為鼠尾動(dòng)脈壓測(cè)定的陽(yáng)性對(duì)照組。相同條件下飼養(yǎng)4周，采用鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓法，每周測(cè)量一次鼠尾動(dòng)脈收縮壓(systolic blood pressure，SBP)。第4周末時(shí)，各組大鼠二氧化碳麻醉后，腹主動(dòng)脈采血，3500 r/min離心10 min，取上清用于檢測(cè)血漿A

8、ngⅡ含量及血漿H2S含量；迅速取出胸主動(dòng)脈，用于(1)胸主動(dòng)脈張力測(cè)定：運(yùn)用離體血管灌流裝置，由RM-6240生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)進(jìn)行血管環(huán)張力記錄，分析累積給予收縮劑AngⅡ(10-10～10-6mol/L)后，胸主動(dòng)脈收縮力的變化；觀察AT1R拮抗劑洛沙坦(Losartan)孵育30 min后，對(duì)AngⅡ作用的影響。去甲腎上腺素(Norepinephrine，NE1μmol/L)預(yù)收縮血管環(huán)，張力變化達(dá)坪值后，累積給予乙酰膽堿(A

9、cetylcholine，Ach10-8～10-4 mol/L)或硝普鈉(SodiumNitroprusside，SNP，10-9～10-6mol/L)后，觀察記錄胸主動(dòng)脈的ACh介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張和SNP介導(dǎo)的非內(nèi)皮依賴性舒張作用。(2)Western blot檢測(cè)胸主動(dòng)脈AT1R蛋白的表達(dá)。(3)硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)法測(cè)定胸主動(dòng)脈丙二醛(malondiadehyde，MDA)含量。(4)黃

10、嘌呤氧化酶法檢測(cè)胸主動(dòng)脈超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)的活性。
　　結(jié)果：(1)術(shù)后4周，2K1C組大鼠尾動(dòng)脈壓升高，明顯高于sham組(P<0.05)；2K1C+NaHS組及2K1C+captopril組鼠尾動(dòng)脈壓較2K1C組明顯降低(P<0.05)。2K1C組血漿AngⅡ的水平顯著高于sham組(P<0.05)，2K1C+NaHS組血漿AngⅡ水平較2K1C組明顯降低(P<0.05)。血漿H

11、2S水平2K1C組明顯低于sham組(P<0.05)，2K1C+NaHS組較2K1C組明顯升高(P<0.05)。(2)離體血管環(huán)灌流時(shí)，隨著AngⅡ濃度的升高，各組離體胸主動(dòng)脈環(huán)收縮反應(yīng)增強(qiáng)，呈劑量依賴性效應(yīng)關(guān)系；在應(yīng)用10-8 mol/L、10-7 mol/L和10-6mol/L AngⅡ灌流時(shí)，2K1C組離體胸主動(dòng)脈對(duì)AngⅡ收縮反應(yīng)均明顯強(qiáng)于sham組(4.20±0.31％vs.6.54±0.55％，P<0.05；9.05±2.3

12、3％vs.21.52±2.45％，P<0.01；12.87±4.6％vs.34.23±6.47％，P<0.01)，說明2K1C組大鼠胸主動(dòng)脈對(duì)AngⅡ的反應(yīng)性增強(qiáng)；2K1C+NaHS組與2KIC組相比，離體胸主動(dòng)脈對(duì)AngⅡ的收縮反應(yīng)性減弱，且在10-7mol/L和10-6mol/L兩個(gè)濃度的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(15.40±2.68％vs.21.52±2.45％，P<0.01；16.16±4.23％vs.34.23±6.47％，P<0.0

13、1)。Losartan孵育30 min后，各組胸主動(dòng)脈對(duì)AngⅡ的反應(yīng)消失，各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)與sham組相比，2K1C組胸主動(dòng)脈對(duì)Ach介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)明顯減低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(100.21±0.33％vs.50.76±3.67％，P<0.01)。與2K1C組比較，2K1C+NaHS組的內(nèi)皮依賴性舒張效應(yīng)增強(qiáng)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(50.76±3.67％vs.64.82±9.42％，P<0.05)。各組胸主動(dòng)脈對(duì)SNP介導(dǎo)的

14、非內(nèi)皮依賴性舒張效應(yīng)均無明顯差異。(4)Western blot結(jié)果，AT1R蛋白表達(dá)在2K1C組與sham組相比明顯上調(diào)(P<0.05)，2K1C+NaHS組與2K1C組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的降低，比sham組略高。(5)2K1C組胸主動(dòng)脈MDA含量比sham組增高，2K1C+NaHS組MDA含量較2K1C組降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。(6)2K1C組胸主動(dòng)脈SOD活性比sham組明顯降低，2K1C+NaHS組SOD活性較2K1C