食品企業(yè)污水中細菌的基因芯片快速檢測技術.pdf

1、食品企業(yè)污水中含有各種無機污物和有機污物，同時還含有很多細菌，包括大腸桿菌、可能存在的致病細菌和雜菌等，因此水質混濁而臟臭。同時，由于污水處理效率低(估計僅為20％～30％)，大部分污水未經妥善處理就直接或間接排入水體，惡化水質，污染環(huán)境，其中夾帶的致病菌，將導致多種疾病的爆發(fā)和流行，嚴重威脅著人類的健康。 為了快速、準確地檢測食品企業(yè)污水中存在的細菌，建立一種采用基因芯片技術對食品企業(yè)污水中常見細菌檢測和鑒定的實驗方法。

2、 從上海部分食品企業(yè)采集污水水樣后進行純種分離培養(yǎng)，從第一期水樣中獲得38株純種菌種樣本；第二期水樣培養(yǎng)后，又分離出20株純種菌種樣本。對兩期培養(yǎng)所得菌種進行鑒定，共得12株純種細菌。此次實驗中的絕大多數細菌都為革蘭氏陰性桿菌，且絕大多數菌種為好氧型菌，其余為兼性菌，并不存在厭氧性菌。 實驗中設計了8對特異引物并將8對引物分成兩組進行PCR反應：引物Ⅰ為(Kp+HlyA+InvA+ipaH)；引物Ⅱ為(Cadc+OprI+En

3、t+23SrRNA)效果良好。 通過實驗摸索，適宜的PCR反應循環(huán)數為35個循環(huán)，確定適宜雜交溫度為48℃，洗片采用洗液A和洗液B。 本實驗所涉及的7種細菌中，O157:H7型大腸桿菌和沙門氏菌的檢測濃度可以低至10-3μg/ml，在整個擴增體系中達到pg級；即使是敏感性相對較低的肺克菌、綠膿桿菌、腸球菌和志賀氏菌，其檢測下限也為10-1μg/ml。實驗中所制作的基因芯片對目的細菌檢測的敏感性是很高的。 隨機選擇

4、肺炎克雷白(Kp)、大腸桿菌(Cadc)和沙門氏菌(InvA)為代表進行芯片重復性檢測實驗，根據PCR產物電泳結果和芯片雜交掃描結果驗證芯片檢測的重復性。檢測結果表明，用實驗中制備的基因芯片檢測上述3種細菌具有良好的重現性。 用實驗制備的基因芯片對模擬水樣檢測的結果與疾控中心配制的菌液相比較，準確率100％，說明該基因芯片對目的細菌特征基因的檢測結果是可靠的，并用該方法對從實際水樣中分離的細菌進行了檢測，具有高準確率。該項技術的