轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)基因芯片研制.pdf

1、目前,轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)技術(shù)主要以PCR技術(shù)為基礎(chǔ),檢測(cè)外源基因序列.PCR技術(shù)簡(jiǎn)單方便,靈敏度高,但無法實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品高通量檢測(cè).基因芯片技術(shù)的發(fā)展為轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品高通量檢測(cè)提供了技術(shù)平臺(tái).該研究利用基因芯片技術(shù),開展了有關(guān)轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)芯片的研制工作,主要結(jié)果如下:1.改良了傳統(tǒng)的CTAB方法,成功地從供試大豆種子及豆粕中提取出了高質(zhì)量的DNA.建立了轉(zhuǎn)基因大豆單基因PCR檢測(cè)和MPCR檢測(cè)體系,其中MPCR檢測(cè)體系的建立提高了轉(zhuǎn)基

2、因大豆的檢測(cè)效率.2.自制聚賴氨酸片基,并與進(jìn)口片基進(jìn)行打印測(cè)試比較,結(jié)果表明,自制片基與進(jìn)口片基質(zhì)量相同,完全滿足制作基因芯片的要求.自制片基使片基制作成本降到原來的1/5,大大節(jié)省了實(shí)驗(yàn)開支.3.利用自制的片基制作基因芯片,同時(shí)優(yōu)化了基因芯片的制作參數(shù),確定了最佳點(diǎn)樣液種類和上樣體積;深入研究了激光對(duì)熒光染料的漂白作用,量化了激光對(duì)熒光染料的漂白效應(yīng);比較了不同PMT值下熒光增益與信噪比之間的關(guān)系.4.收集了商業(yè)化轉(zhuǎn)基因作物常用轉(zhuǎn)基

3、因元件的序列信息,確定了這些元件的保守區(qū)段.然后通過各種渠道收集含有這些轉(zhuǎn)基因元件的克隆載體或表達(dá)載體,并設(shè)計(jì)了相應(yīng)PCR引物擴(kuò)增保守區(qū)段,將其制備為探針.用機(jī)械手將這些探針點(diǎn)到聚賴氨酸包被的載玻片上,制備了轉(zhuǎn)基因檢測(cè)芯片.5.利用該研究制作的轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)芯片,成功地從轉(zhuǎn)基因大豆中檢測(cè)出外源基因序列.結(jié)果表明,基因芯片不僅能夠進(jìn)行高通量的檢測(cè),而且檢測(cè)效率大大高于MPCR.同時(shí),由于基因芯片建立在分子雜交基礎(chǔ)上,檢測(cè)結(jié)果可信度大大提