轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測基因芯片研制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目前,轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測技術主要以PCR技術為基礎,檢測外源基因序列.PCR技術簡單方便,靈敏度高,但無法實現(xiàn)轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品高通量檢測.基因芯片技術的發(fā)展為轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品高通量檢測提供了技術平臺.該研究利用基因芯片技術,開展了有關轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測芯片的研制工作,主要結(jié)果如下:1.改良了傳統(tǒng)的CTAB方法,成功地從供試大豆種子及豆粕中提取出了高質(zhì)量的DNA.建立了轉(zhuǎn)基因大豆單基因PCR檢測和MPCR檢測體系,其中MPCR檢測體系的建立提高了轉(zhuǎn)基

2、因大豆的檢測效率.2.自制聚賴氨酸片基,并與進口片基進行打印測試比較,結(jié)果表明,自制片基與進口片基質(zhì)量相同,完全滿足制作基因芯片的要求.自制片基使片基制作成本降到原來的1/5,大大節(jié)省了實驗開支.3.利用自制的片基制作基因芯片,同時優(yōu)化了基因芯片的制作參數(shù),確定了最佳點樣液種類和上樣體積;深入研究了激光對熒光染料的漂白作用,量化了激光對熒光染料的漂白效應;比較了不同PMT值下熒光增益與信噪比之間的關系.4.收集了商業(yè)化轉(zhuǎn)基因作物常用轉(zhuǎn)基

3、因元件的序列信息,確定了這些元件的保守區(qū)段.然后通過各種渠道收集含有這些轉(zhuǎn)基因元件的克隆載體或表達載體,并設計了相應PCR引物擴增保守區(qū)段,將其制備為探針.用機械手將這些探針點到聚賴氨酸包被的載玻片上,制備了轉(zhuǎn)基因檢測芯片.5.利用該研究制作的轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品檢測芯片,成功地從轉(zhuǎn)基因大豆中檢測出外源基因序列.結(jié)果表明,基因芯片不僅能夠進行高通量的檢測,而且檢測效率大大高于MPCR.同時,由于基因芯片建立在分子雜交基礎上,檢測結(jié)果可信度大大提

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