應用基因芯片檢測食品中金黃色葡萄球菌.pdf

1、傳統(tǒng)方法對食品中的金黃色葡萄球菌的檢測所需要的時間太長，不能在短時間內(nèi)檢測出金黃色葡萄球菌。利用生物芯片進行金黃色葡萄球菌的的高通量檢測和鑒定已經(jīng)成為許多人的共識，但至今還未真正實現(xiàn)。為了在短時間內(nèi)檢測出食品中的金黃色葡萄球菌，本研究在利用生物芯片的高通量基礎上，建立一種基于基因芯片快速檢測和鑒定食品中金黃色葡萄球菌的技術(shù)。 從金黃色葡萄球菌中提取染色體DNA，通過細菌通用引物擴增金黃色葡萄球菌的16SrRNA，以16SrRNA

2、為靶標，針對待檢的金黃色葡萄球菌設計基因探針，制備基因芯片。為了減少基因芯片假陰性和假陽性的比率，還特別設置了細菌的通用探針和葡萄球菌屬的特異性探針。待檢測的金黃色葡萄球菌擴增和標記后，與芯片雜交，對雜交圖譜分析歸納，得到一套特異的檢測方式。然后用基因芯片檢測從食品中分離的金黃色葡萄球菌。最后進行金黃色葡萄球菌樣品檢測的靈敏度實驗。 用設計的基因芯片檢測金黃色葡萄球菌，結(jié)果良好。同時也用志賀菌、豬鏈球菌來驗證設計的基因芯片，檢測

3、到的結(jié)果與理論結(jié)果相符。然后用經(jīng)過檢測的基因芯片檢測從食品中分離的金黃色葡萄球菌，檢測到的結(jié)果與理論結(jié)果相符。 以含有金黃色葡萄球菌的特異性探針的基因芯片為模型，，初步探討了利用基因芯片檢測金黃色葡萄球菌的可行性。在已有的基礎上優(yōu)化了雜交和洗滌的條件，縮短了雜交時間。在此基礎上確定了以相對信號強弱為依據(jù)的信號陰陽性判斷思路，以及以特異性雜交圖譜為基礎的金黃色葡萄球菌的檢測方式。結(jié)果表明利用基因芯片實現(xiàn)金黃色葡萄球菌的高通量鑒定是

4、完全可行的，提出的雜交信號判斷方法保證了鑒定結(jié)果的穩(wěn)定性。 該芯片對金黃色葡萄球菌的檢測靈敏度不高，在30ul的體系中達6.8×105cfu才能被檢測到。此靈敏度較低并不意味著該芯片的該芯片檢測系統(tǒng)的靈敏度就很差，因為其實際上取決于樣品的提取和擴增效率。 本研究建立的基因芯片檢測金黃色葡萄球菌具有較強的特異性和穩(wěn)定性，能在較短的時間內(nèi)檢測出待檢的金黃色葡萄球菌，可靠性較好。由于針對金黃色葡萄球菌檢測的特意性和穩(wěn)定性較好。