SRY基因遺傳多態(tài)性及其法醫(yī)學(xué)意義.pdf

1、前言：
　　 位于Y染色體內(nèi)的性別決定基因(sex-determining region on the Ychromosome，SRY)是性別發(fā)育時(shí)期的關(guān)鍵基因。胚胎時(shí)期的SRY基因表達(dá)至一定的閾值后便可觸發(fā)下游一系列的分子瀑布反應(yīng)，激活雄性通路相關(guān)基因，直接或間接地抑制雌性通路相關(guān)基因，最終導(dǎo)致睪丸發(fā)育，雄性性別形成。人類的SRY基因位于Y染色體短臂非重組區(qū)，全長897bp，結(jié)構(gòu)基因只有一個(gè)外顯子而無內(nèi)含子。開放閱讀框架（op

2、en reading frame，ORF）全長615bp，表達(dá)產(chǎn)物為長204氨基酸的多肽。多數(shù)學(xué)者人為將SRY的結(jié)構(gòu)基因分為三個(gè)部分，分別是位于核心的HMG盒(high-mobility group，HMG)及其上游的N端(N-terminal domain，N-TD)與下游的C端（C-terminal domain，C-TD）。SRY基因普遍存在于絕大多數(shù)哺乳動物體內(nèi)，不同哺乳動物HMG-box的序列相對保守，而N-TD和C-TD無論

3、是長度上還是序列都具有較大的差異。
　　 SRY基因本身具有睪丸基因的高突變率的特點(diǎn)，同時(shí)由于SRY基因位于Y染色體非重組區(qū)，可以逃避減數(shù)分裂時(shí)期的基因重組和基因互換。因此，變異位點(diǎn)更易在SRY基因內(nèi)部富集和穩(wěn)定地遺傳。子代SRY基因由父代遺傳而來，很好的保留了父代的特征，代表了種族或群體內(nèi)部的遺傳組成。此外，由于Y染色體有效群體小，對遺傳漂變敏感，因此，SRY基因在基因漸滲和族群遷徙的研究中至關(guān)重要，是人類群體遺傳學(xué)研究領(lǐng)域的

4、熱點(diǎn)基因。SRY基因內(nèi)部含有豐富的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs），SRY-SNP的群體特異性和種族地理特異性很強(qiáng)，易于形成群體特異性多態(tài)，是研究人類父系遷移和進(jìn)化的理想遺傳標(biāo)記。
　　 本研究通過調(diào)查SRY基因在中國5個(gè)不同群體中的分布情況，掌握SRY基因的相關(guān)法醫(yī)物證學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，探討其在法醫(yī)物證學(xué)中的重要意義，同時(shí)為人群遷移和人種進(jìn)化提供新的理論依據(jù)。同時(shí)，本研究還通

5、過調(diào)查不同性別以及不同種屬動物個(gè)體體內(nèi)的SRY基因分布，探討其在法醫(yī)學(xué)性別鑒定及種屬鑒定方面的應(yīng)用價(jià)值。
　　 材料和方法：
　　 1、樣本來源人類樣本為中國遼寧漢族、吉林朝鮮族、西藏自治區(qū)藏族、新疆維吾爾族自治區(qū)哈薩克族和維吾爾族健康男性為實(shí)驗(yàn)組樣本，女性血液樣本為對照組樣本。動物樣本為不同種屬來源的動物血液與肌肉樣本，其中實(shí)驗(yàn)組包括哺乳綱靈長目的人，偶蹄目的豬、牛、山羊、綿羊，奇蹄目的馬、驢，對照組包括食肉目的貓、狗

6、，嚙齒目的鼠，兔形目的兔，兩棲綱的蟾蜍，爬行綱的蛇，魚綱的魚，鳥綱的雞。
　　 2、樣本處理血液樣本干燥后制成血痕放置不同時(shí)間，肌肉樣本以高溫（水煮、油炸、火烤、干燥）處理不同時(shí)間，并將兩種肌肉樣本以不同比例混合處理。
　　 3、實(shí)驗(yàn)方法采用酚-氯仿有機(jī)溶劑法提取基因組DNA，紫外分光光度法檢測DNA含量。自行篩選引物擴(kuò)增人基因組SRY序列，應(yīng)用PCR-RFLP和測序技術(shù)分析的SRY+465基因型。自行篩選引物擴(kuò)增動物基

7、因組種屬特異性SRY序列，聚丙烯酰胺凝膠電泳-銀染技術(shù)分析單一擴(kuò)增體系的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性并檢測多重PCR擴(kuò)增體系的特異性及其對混合樣本的檢出能力。
　　 結(jié)果：
　　 1、5RY+465在中國地區(qū)的北方漢族、藏族、維吾爾族、哈薩克族群體中不具有多態(tài)性，在朝鮮族群體中具有多態(tài)性，等位基因C的頻率為0.61，T的頻率為0.39;DP值為0.4870，多態(tài)性信息含量PIC值為0.4870，PE值為0.4870。
　

8、　 2、應(yīng)用自行設(shè)計(jì)的SRY基因種屬特異性引物構(gòu)建的PCR-SSP分析方法，成功擴(kuò)增了豬、山羊、綿羊、人、馬、牛和驢共7種哺乳動物雄性個(gè)體SRY基因，相同種屬雌性個(gè)體及不同種屬動物均未檢出相應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物，因此根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的有無可以正確判定它們的種屬來源。PCR-SSP分析方法的靈敏度檢驗(yàn)結(jié)果表明，豬、山羊和牛擴(kuò)增體系對模板的最低檢出量為1ng，綿羊、人、馬和驢擴(kuò)增體系對模板的最低檢出量為0.5ng。PCR-SSP穩(wěn)定性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，血液

9、和肌肉組織可獲得成功擴(kuò)增。
　　 3、應(yīng)用自行構(gòu)建的SRY基因復(fù)合擴(kuò)增體系對豬、山羊、綿羊、人、馬、牛和驢共7種哺乳動物雄性個(gè)體擴(kuò)增均獲得相應(yīng)的目的基因片段，無非特異性擴(kuò)增。應(yīng)用SRY基因復(fù)合擴(kuò)增體系檢驗(yàn)混合樣本時(shí)，較低組分的最小檢出比例為1∶50。
　　 結(jié)論：
　　 1、SRY+465位點(diǎn)在朝鮮族群體中有較好的遺傳多態(tài)性，在北方漢族、藏族、維族和哈薩克族群體缺乏多態(tài)性，提示SRY+465位點(diǎn)可作為群體特異性遺

10、傳標(biāo)記的候選遺傳標(biāo)記，在人類遺傳學(xué)及法醫(yī)學(xué)中具有一定意義。
　　 2、本研究構(gòu)建的SRY基因PCR-SSP分析方法，種屬特異性好，靈敏度高(0.5ng～1ng)，穩(wěn)定性好，可同時(shí)鑒定常見生物檢材的種屬和性別，在法醫(yī)物證學(xué)中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。
　　 3、本研究構(gòu)建的SRY基因復(fù)合擴(kuò)增種屬鑒定方法，同時(shí)對豬、山羊、綿羊、人、馬、牛和驢共7種哺乳動物雄性個(gè)體擴(kuò)增，種屬特異性好，擴(kuò)增結(jié)果穩(wěn)定，極大的提高了檢出效率，尤其是對混合