椎間盤髓核組織的自身免疫反應(yīng)及其法醫(yī)學(xué)意義.pdf

1、在臨床法醫(yī)學(xué)鑒定工作中，涉及腰椎間盤突出癥(Lumbar intervertebraldisc herniation，LDH)的案件較多。目前，工作中關(guān)于LDH的鑒定主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查以及神經(jīng)電生理學(xué)技術(shù)。然而由于臨床表現(xiàn)的主觀性，影像學(xué)檢查只能單純反應(yīng)形態(tài)學(xué)變化，而神經(jīng)電生理技術(shù)側(cè)重于神經(jīng)根功能狀態(tài)的評(píng)估，各自具有一定的局限性。近年來(lái)，LDH免疫學(xué)方面的研究有望為腰椎間盤退行性改變與LDH的鑒別及LDH發(fā)病時(shí)間的法醫(yī)學(xué)鑒定提

2、供新的手段。 椎間盤的髓核組織自胚胎發(fā)育成熟后便因血管退化而無(wú)血供，被纖維環(huán)包裹其中與血液及淋巴系統(tǒng)相隔絕，與外界物質(zhì)的交換僅通過(guò)軟骨終板的滲透作用完成。獨(dú)特的解剖結(jié)構(gòu)和物質(zhì)交換方式使其具備了自身抗原的基礎(chǔ)。在損傷或疾病等病理情況下，髓核組織接觸免疫系統(tǒng)，引起自身免疫反應(yīng)(autoimuneresponse)。 本研究采用新西蘭大耳兔髓核組織免疫同種兔后制備抗血清，免疫酶斑點(diǎn)技術(shù)(Dot-ELISA)測(cè)定免疫前后及實(shí)驗(yàn)組

3、與對(duì)照組血清IgG、IgM抗體滴度變化情況，從而檢測(cè)髓核組織的免疫原性，并探討血清中抗髓核抗體滴度變化對(duì)法醫(yī)學(xué)鑒定腰椎間盤突出癥的意義所在。 材料與方法 1、新西蘭大耳兔，雄性，健康狀況良好，體重2.0-2.5千克，月齡在六個(gè)月以上。 2、無(wú)菌條件下提取新西蘭大耳兔髓核組織勻漿、離心后的的懸濁液做為抗原溶液。 3、實(shí)驗(yàn)組皮下注射髓核組織懸濁液與佐劑的乳化劑免疫新西蘭大耳兔，生理鹽水對(duì)照組注射與實(shí)驗(yàn)組相同劑

4、量生理鹽水，佐劑對(duì)照組注射與實(shí)驗(yàn)組相同劑量佐劑，實(shí)驗(yàn)方法相同。 4、免疫酶斑點(diǎn)技術(shù)檢測(cè)血清IgG、IgM抗體滴度的變化及程度。 5、卡方檢驗(yàn)分析免疫前后血清IgG、IgM抗體滴度變化及實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清IgG、IgM抗體滴度變化的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1、方陣實(shí)驗(yàn)篩選IgG抗體最適實(shí)驗(yàn)條件，包被抗原濃度50μg/ml時(shí)，免疫后血清1：1-1：128稀釋范圍內(nèi)，硝酸纖維膜顯色效果良好，且隨著血清

5、中抗體濃度的下降，顏色呈現(xiàn)逐級(jí)遞減趨勢(shì)。 2、方陣實(shí)驗(yàn)篩選IgM抗體最適實(shí)驗(yàn)條件，包被抗原濃度40μg/ml時(shí)，免疫后血清1：1-1：32稀釋范圍內(nèi)，硝酸纖維膜顯色效果良好，且隨著血清中抗體濃度的下降，顏色呈現(xiàn)逐級(jí)遞減趨勢(shì)。 3、兔髓核組織懸濁液為抗原皮下注射免疫同種兔，免疫后血清中IgG、IgM抗體滴度較免疫前升高，血清中IgG抗體滴度為1：128，IgM抗體滴度為1：32，二者升高程度有較大差異。 4、髓核組

6、織懸濁液為抗原免疫后的實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水對(duì)照組及佐劑對(duì)照組相比較，實(shí)驗(yàn)組血清中IgG、IgM抗體滴度較對(duì)照組升高。 討論 當(dāng)抗原與其對(duì)應(yīng)抗體分子比例最為合適時(shí)，它們才會(huì)彼此相互連接成具有完整主體結(jié)構(gòu)的免疫復(fù)合物巨大網(wǎng)格狀聚集體，使蛋白質(zhì)分子的疏水結(jié)構(gòu)充分暴露，此時(shí)的抗原與其對(duì)應(yīng)的抗體結(jié)合最為牢固。經(jīng)過(guò)方陣實(shí)驗(yàn)可知，包被抗原濃度為50μg/ml免疫后血清稀釋1：128為檢測(cè)IgG抗體的最適實(shí)驗(yàn)條件；包被抗原濃度為40μg/m

7、l，免疫后血清稀釋1：32為檢測(cè)IgM抗體的最適實(shí)驗(yàn)條件。 在最適實(shí)驗(yàn)條件下，檢測(cè)血清IgG、IgM抗體滴度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果按α=0.05水平檢驗(yàn)，免疫前后血清中IgG、IgM抗體滴度變化及實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組血清中IgG、IgM抗體滴度變化的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明髓核組織具有免疫原性，與機(jī)體的免疫系統(tǒng)接觸后，可刺激機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答，導(dǎo)致血清中抗髓核IgG抗體、抗髓核IgM抗體滴度的升高。 髓核組織抗原成分復(fù)雜，具有較高異質(zhì)性，其

8、中一部分不是髓核組織所特有的，與兔體內(nèi)其他組織器官具有相同或相似的抗原；或髓核組織內(nèi)含有的特異性抗原尤其是蛋白質(zhì)抗原成分具有多個(gè)抗原決定簇，與體內(nèi)其他組織器官的抗原決定簇相同或相似，血清中存在的抗體能與髓核組織內(nèi)抗原成分發(fā)生交叉反應(yīng)。則未經(jīng)過(guò)免疫的兔血清中抗體和髓核組織能夠發(fā)生反應(yīng)，出現(xiàn)陽(yáng)性或者弱陽(yáng)性改變。 在排除感染、肝腎疾病及其他自身免疫性疾病等導(dǎo)致血清中抗體滴度升高的情況下，根據(jù)血清中抗體滴度變化情況，可對(duì)腰椎間盤退行性改