重組Sap2蛋白接種對免疫抑制小鼠系統(tǒng)感染白念珠菌的保護(hù)作用.pdf

1、背景：
　　 隨著新治療技術(shù)如骨髓移植、器官移植和強(qiáng)化治療的開展及廣譜抗生素和免疫抑制藥物的廣泛應(yīng)用,臨床上發(fā)生念珠菌感染的現(xiàn)象越來越普遍,而抗真菌藥物由于其毒副作用和易產(chǎn)生耐藥的局限性,使得白念珠菌在免疫低下患者中的發(fā)病率依然居高不下.由此,為了探索免疫低下患者中預(yù)防白念珠菌感染的措施,有必要建立適當(dāng)?shù)拿庖咭种坪笙到y(tǒng)感染念珠菌的動物模型,來模擬免疫功能低下患者的情況.我們同時也研究了重組念珠菌天冬氨酰蛋白酶(scrcted a

2、spartylproteinase,Sap)預(yù)防接種對免疫功能低下時系統(tǒng)感染念珠菌的保護(hù)作用.
　　 第一部分
　　 目的：
　　 建立免疫抑制小鼠系統(tǒng)感染白念珠菌模型,并觀察其主要影響因素.
　　 方法：
　　 1)以環(huán)磷酰胺(CTX)100mg/kg和200mg/kg兩個劑量水平分別對6周齡BALB/c小鼠進(jìn)行單次腹腔注射(各3組),48h后各對應(yīng)組分別經(jīng)尾靜脈注射1x105、106,107/

3、ml的白念珠菌,通過各組的死亡率來確定半數(shù)致死量.2)以50、100mg/kgCTX單次腹腔注射,觀察外周血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)被抑制的程度.3)分別采用4和8周齡小鼠來觀察周齡對死亡率的影響.4)通過組織病理檢查和腎組織真菌培養(yǎng)來驗證模型.
　　 結(jié)果：
　　 1)100mg/kgCTX+1×105/ml白念珠菌作用后,小鼠的死亡率接近50％.2)100mg/kgCTX單次腹腔注射后,外周血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)下降

4、超過30％.3)4周齡小鼠對模型建立條件的耐受性較差,死亡率高。4)組織病理檢查和腎組織真菌培養(yǎng)結(jié)果表明模型小鼠腎臟中有菌絲生長或局灶性膿腫形成.
　　 結(jié)論：
　　 1)成功建立了免疫抑制后系統(tǒng)感染白念珠菌的小鼠模型.2)模型建立條件下,白念珠菌對小鼠腎組織有高親嗜性.
　　 第二部分
　　 目的：
　　 觀察重組Sap2蛋白免疫接種3次(間隔1周)對模型小鼠抗白念珠菌系統(tǒng)感染的保護(hù)作用.

5、>　　 方法：
　　 6周齡BALB/C小鼠隨機(jī)分成3組:1)間隔1周,重組Sap2+弗氏完全佐劑(CFA)脛前肌注射3次,第3次免疫后1周時,按體重單次腹腔注射100mg/kgCTX,48h后經(jīng)尾靜脈注射1×105/ml的白念珠菌,劑量為0.01ml/g.2)間隔1周,CFA脛前肌注射3次,其余干預(yù)同第1組.3)間隔1周,PBS脛前肌注射3次,其余干預(yù)同第1組.分剮以這3種分組方式飼養(yǎng)小鼠,并在不同時間點(diǎn)檢測下列指標(biāo),探討模

6、型小鼠的免疫功能動態(tài)變化:1)白念珠菌感染后21天內(nèi)各組小鼠的死亡率.2)間接ELISA法測定各組小鼠血清特異性IgG抗體水平.3)ELISA法測定小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量.4)流式細(xì)胞儀分析小鼠脾淋巴細(xì)胞中的CD4+/CD8+T細(xì)胞比例.5)測定各組小鼠腎臟中的荷菌量。6)比較各組小鼠脾臟重量.7)對各組小鼠的腎、肝、肺組織進(jìn)行組織病理檢查.
　　 結(jié)果：
　　 1)免疫組小鼠的死亡率

7、顯著低于對照組.2)免疫組小鼠血清中的特異性IgG抗體水平的顯著高于對照組.3)念珠菌攻擊后的第1、4、7天期間,IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α在第4天時的測量值高于第1和第7天水平.其中TNF-α的測量值始終低于正常對照水平.4)念珠菌攻擊后的第1、4、7天期間,各組小鼠的CD4+/CD8+比值呈現(xiàn)相似的變化,其中第4天時的測量值低于第1和第7天水平.5)免疫組小鼠的腎臟荷菌量顯著低于對照組.6)免疫組小鼠的脾臟重量顯著高