展示白色念珠菌熱休克蛋白90特異表位的雜合噬菌體抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用研究.pdf

1、白色念珠菌是寄生在健康宿主皮膚、粘膜的條件致病菌，它可以作為機(jī)會病原體在人體免疫能力下降和正常菌群失調(diào)時，引起淺層感染和系統(tǒng)感染。近年來，隨著因治療擴(kuò)散性腫瘤以及免疫抑制劑的應(yīng)用而引起的免疫缺陷患者日益增多，系統(tǒng)性白色念珠菌感染的發(fā)病率明顯升高，它的危害性極大，死亡率非常高。白色念珠菌得不到控制的主要原因是缺乏有效的早期診斷、治療和預(yù)防的方法。臨床上依賴于傳統(tǒng)的血培養(yǎng)的方法診斷該類疾病，但存在著檢出率低，敏感性差和診斷過程時間長的問題。

2、臨床上采用多粘菌素B和吡唑類化學(xué)藥物對患者進(jìn)行治療，但是耐藥性的病例在不斷增加。為了防止其復(fù)發(fā)，我們也延長了治療的周期，但存在著明顯的副作用。所以早期檢測出白色念珠菌的感染，在患者進(jìn)入免疫抑制狀態(tài)前通過疫苗來增強(qiáng)機(jī)體免疫力具有重要意義。 本研究是利用展示有白色念珠菌熱休克蛋白90(HSP90) 特異表位(DEPAGE)的雜合噬菌體(以下簡稱SE-CA-HSP90)作為抗原進(jìn)行抗系統(tǒng)性白色念珠菌感染的免疫保護(hù)作用的研究，以期為真菌

3、預(yù)防性疫苗的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)包括以下內(nèi)容： 1.大量制備雜合噬菌體SE-CA-HSP90在野生噬菌體的幫助下，將含有編碼白色念珠菌HSP90特異表位(DEPAGE)DNA序列的pfd8H載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGl，轉(zhuǎn)化pfd8H的大腸桿菌成功地分泌表達(dá)出展示有DEPAGE表位的雜合噬菌體，再用PEG6000回收和純化培養(yǎng)液中的噬菌體粒子。雜合噬菌體樣品經(jīng)SDS-PAGE電泳后，在凝膠上可見有一條融合蛋白帶，明顯滯后于野生型噬菌體

4、外殼蛋白帶，采用敏感性較高的銀染色方法染色，未見其它雜蛋白帶，說明達(dá)到純化要求。 2.雜合噬菌體SE-CA-HSP90抗系統(tǒng)性白色念珠菌免疫保護(hù)研究 (1) 建立系統(tǒng)性白色念珠菌感染模型，并篩選最佳感染劑量： (2) 以雜合噬菌體SE-CA-HSP90為抗原免疫C57BL/6小鼠，同時注射野生型噬菌體和緩沖液TE作為對照組。數(shù)周后尾靜脈進(jìn)行系統(tǒng)性白色念珠菌感染； (3) 不同時期進(jìn)行下列指標(biāo)的觀察和檢測：

5、 系統(tǒng)性白色念珠菌感染15天內(nèi)動物死亡率的統(tǒng)計； 感染15天后，將免疫動物的腎臟研磨成勻漿，在沙堡氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)白色念珠菌，檢測白色念珠菌菌落數(shù)的變化； 制作組織病理切片，進(jìn)行動物腎臟受損情況的對比。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明免疫雜合噬菌體SE-CA-HSP90組，與免疫野生噬菌體組和注射TE組相比，對系統(tǒng)性白色念珠菌感染的抵抗力增加，表現(xiàn)在小鼠的存活率增加，寄居在腎中的白色念珠菌數(shù)量降低，組織病理學(xué)顯示腎小管內(nèi)的白