MDS患者外周血單個核細胞端粒異常及相關機制研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測MDS患者外周血單個核細胞及T細胞中hTERT選擇性剪接變異體的表達并分析其與端粒酶活性，端粒長度及hTERT表達的相關性，闡明MDS患者端粒異常的相關分子機制。
　　方法：
　　收集30例健康供者外周血與30例MDS患者外周血，通過密度梯度離心方法分離出外周血單個核細胞，F(xiàn)icoll法聯(lián)合Human T cell enrichment cocktail分離外周血T細胞，Real-time PCR方

2、法檢測外周血單個核細胞及T細胞的端粒酶逆轉錄酶（hTERT）選擇性剪接變異體的表達。Real-time PCR方法測量外周血單個核細胞及T細胞的端粒長度及hTERT的表達。端粒酶重復序列擴增法（TRAP）-Elisa檢測 MDS患者及健康供者外周血單個核細胞及 T細胞端粒酶活性。用Spearman相關分析方法分析MDS患者及健康對照者外周血單個核細胞及T細胞 hTERT選擇性剪接變異體與端粒酶活性，端粒長度及 hTERT表達之間的相關性

3、。
　　結果：
　　檢測結果顯示MDS患者外周血單個核細胞hTERT選擇性剪接變異體α+β+及變異體α+β-的表達較健康對照者升高（n=30，p=0.016；n=30，p=0.002）。與健康對照者相比，MDS患者外周血單個核細胞端粒長度明顯縮短(n=30，p=0.002)；端粒酶活性及hTERT表達升高（n=30，p=0.022；n=30，p=0.007）。相關性分析結果顯示，MDS患者外周血單個核細胞端粒酶活性只與hTE

4、RT表達量相關；MDS患者外周血單個核細胞hTERT選擇性剪接變異體、hTERT表達、端粒長度、端粒酶活性與患者臨床病歷資料無明顯相關性。MDS患者外周血 T細胞hTERT選擇性剪接變異體表達較健康對照者升高，其中變異體α+β-的表達較對照者升高（n=20，p<0.001），變異體α+β+的表達也較對照者升高，但差異無統(tǒng)計學意義（n=20，p=0.09）。MDS患者外周血T細胞端粒酶活性及hTERT表達較健康對照者升高（n=20，p=0

5、.002；n=20，p=0.001），端粒長度較正常對照組縮短（n=20，p<0.001）。相關性分析結果顯示，MDS患者外周血T細胞端粒酶活性只與 hTERT表達量相關；與 hTERT選擇性剪接變異體表達及端粒長度無相關性。
　　結論：
　　MDS外周血單個核細胞及T細胞端粒長度較健康對照者縮短，端粒酶活性及hTERT表達升高；MDS外周血單個核細胞及T細胞hTERT選擇性剪接變異體的表達水平與端粒酶活性及 hTERT表達