煙草中NAC類轉(zhuǎn)錄因子基因的克隆與分析.pdf

1、煙堿是煙草根系合成的次生代謝產(chǎn)物,是煙草特有的生物堿。打頂以后,煙株體內(nèi)煙堿含量大量積累,然而對造成煙株體內(nèi)煙堿含量升高的原因以及煙堿合成的調(diào)節(jié)機制并不清楚。打頂前后煙堿合成能力的巨大差異,是用來研究調(diào)控?zé)焿A合成分子機制的最佳時期,通過篩選煙株打頂前、后根尖組織的差異表達的基因?qū)⒂行碌陌l(fā)現(xiàn)。
　　 植物中含有大量的轉(zhuǎn)錄因子基因,在調(diào)控植物生長發(fā)育和逆境脅迫應(yīng)答中起重要作用。常見的轉(zhuǎn)錄因子家族有AP2/EREBP、bZIP、MYB

2、、WRKY和NAC等。本研究以本實驗室構(gòu)建的SSH-cDNA文庫中篩選出的NAC類轉(zhuǎn)錄因子EST序列為探針,電子克隆得到NtNAC-R1全長cDNA序列,對于研究調(diào)控?zé)焿A生物合成的分子機制有重要意義。本實驗主要結(jié)果如下:
　　 (1)熒光定量PCR驗證SSH-cDNA文庫差異基因EST序列打頂前后的表達模式,F-box、MYB、NAC、SAHH、st1在打頂24h后表達水平上升,WRKY、AUXIN—induced mRNA在打

3、項24h后表達水平下降。
　　 (2)采用電子克隆和RT-PCR從煙草根尖組織克隆到NtNAC-R1。煙草NtNAC-R1開放性閱讀框架長度為936 bp,編碼311個氨基酸,具有NAC轉(zhuǎn)錄因子家族典型的保守結(jié)構(gòu)域。
　　 (3)組織特異性分析表明NtNAC-R1基因在根系中具有高水平表達。RT-PCR和Norhern雜交對煙草打頂前、后根尖組織中NtNAC-R1的表達模式分析表明該基因在煙株打頂后2—4h表達水平下降,