石斛MYB類轉錄因子基因克隆和功能初步研究.pdf

1、石斛屬（Dendrobium）植物是蘭科（Orchidaceae）的附生植物，它是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材。
　　 目前，對石斛屬植物進行基因克隆及其功能研究在國內外報道甚少，在藥用石斛研究中，通過對優(yōu)良基因的克隆，并結合轉基因技術能夠快速實現基因的轉移并克隆出具有經濟價值的目的基因。從石斛中克隆分離藥用因子基因、抗逆基因、促生長開花基因等具有潛在經濟價值的目的基因來提高石斛的產量和品質。
　　 本實驗采用TAIL-PCR技

2、術，通過對實驗室cDNA文庫中已知的小片段信息設計引物，對金釵石斛基因組DNA進行PCR擴增，得到一個片段的基因組DNA并根據序列信息設計TAIL-PCR引物進行TAIL-PCR擴增，最終獲得已知序列側翼的未知序列并拼接成一條完整的具ORF閱讀框的基因序列，共克隆獲得3條基因，兩條MYB基因和一條EREB基因，并全部構建了克隆載體和表達載體，我們從中選取了一條MYB基因來深入研究，并將其命名為DnMYB1，進行生物信息學分析，進行轉基因

3、及熒光定量PCR驗證其功能。
　　 通過Gateway系統(tǒng)的克隆載體和表達載體的構建技術，并利用農桿菌GV3001將基因DnMYB1轉移至模式植物擬南芥中，在轉基因擬南芥的T2和T3代觀察其表型變化和該目標基因的表達變化，以及該基因的擬南芥同源基因的表達變化。過量表達DnMYB1的轉基因擬南芥各個株系的表型變異顯著，其中刺毛明顯減少甚至沒有，整個葉片表面呈光滑狀，莖也是光滑無刺毛存在；RNAi擬南芥各株系，葉片在幼苗期還有少許的