海戰(zhàn)傷大鼠血糖變化特點(diǎn)及機(jī)制探討.pdf

1、第一部分海水浸泡對腹部開放傷大鼠血糖的影響
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^觀測海戰(zhàn)傷大鼠隨機(jī)血糖及IPGTT等糖代謝相關(guān)指標(biāo)隨時(shí)間的變化特點(diǎn)，研究腹部開放合并海水浸泡大鼠是否存在血糖代謝的異常。
　　 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：成年雄性SD大鼠，18只，隨機(jī)分為3組，每組6只。分別為對照組(C組)，腹部開放傷45min組(L45組)，腹部開放合并海水浸泡45min組(L+S45組)。觀測術(shù)前及術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)下列指標(biāo)水平，包括(1)體溫；(2)IPG

2、TT；(3)隨機(jī)血糖。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：大鼠體溫測定采用電子體溫計(jì)測定肛溫方法。大鼠血糖通過尾尖取血后快速血糖儀測定。IPGTT按照AMDCC的步驟進(jìn)行少許改變，主要步驟是大鼠禁食6h后測定空腹血糖，隨即用10％的葡萄糖按照0.01ml/g劑量腹腔注射，于5，15，30，60，120min時(shí)分別測定血糖水平。
　　 結(jié)果：術(shù)前各組大鼠體重、肛溫、隨機(jī)血糖、IPGTT無明顯差異，術(shù)后各項(xiàng)結(jié)果提示(1)同C組相比，兩個(gè)手術(shù)組

3、大鼠肛溫均出現(xiàn)不同程度降低，其中L+S45組體溫最低，低體溫持續(xù)時(shí)間最長；(2)同C組相比，兩組術(shù)后隨機(jī)血糖均明顯升高。術(shù)畢當(dāng)時(shí)L45組大鼠血糖最高，L+S45組大鼠次之。術(shù)后6小時(shí)，兩組大鼠血糖開始出現(xiàn)下降但仍明顯高于C組。術(shù)后18h，L+S45組大鼠血糖高于L45組大鼠且該差異一直持續(xù)到傷后90h，186h時(shí)三組血糖無差異。(3)術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)各組IPGTT存在差異。IPGTT異常一方面表現(xiàn)為L+S45組和L45組大鼠術(shù)后IPGTT各

4、點(diǎn)血糖同術(shù)前相比均升高，曲線下糖面積(AUC)明顯增加，而對照組無明顯變化；另一方面，L+S45組大鼠與L45組大鼠相比，IPGTT異常及AUC增加更明顯，持續(xù)時(shí)間更長。
　　 結(jié)論：(1)海戰(zhàn)傷大鼠會出現(xiàn)高血糖，但是在術(shù)后短期(0-6h)L45組大鼠隨機(jī)血糖高于L+S45組大鼠，后期(≥18h)L+S45組大鼠血糖高于L45組大鼠。
　　 (2)L+S45組大鼠術(shù)后糖耐量異常程度更重且異常持續(xù)時(shí)間更長。
　　

5、(3)海水浸泡導(dǎo)致腹部開放傷大鼠低體溫狀態(tài)明顯加重。
　　 第二部分海戰(zhàn)傷大鼠傷后早期IPGTT變化與器官損傷指標(biāo)的相關(guān)性研究
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^對比不同致傷條件下大鼠傷后12h的復(fù)溫過程，IPGTT的變化以及14h時(shí)血生化指標(biāo)，分析海戰(zhàn)傷模型中的創(chuàng)傷、低溫以及高滲3種致傷因素是否同糖代謝異常相關(guān)，海戰(zhàn)傷后血糖紊亂是否具有指示器官損傷程度的臨床意義。
　　 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：按照接受處理的方法不同，SD大鼠被隨機(jī)分入5

6、組：麻醉對照組(C組)、腹膜切開縫合組(L組)、腹部開放傷45min組(L45組)、腹部開放合并林格氏液浸泡45min組(L+R45組)及腹部開放合并海水浸泡45min組(L+S45組)，每組6只。術(shù)前各項(xiàng)指標(biāo)基線水平觀測包括1)術(shù)前體溫；2)術(shù)前IPGTT；3)術(shù)前隨機(jī)血糖水平。術(shù)后各項(xiàng)指標(biāo)觀測包括1)術(shù)后12h內(nèi)體溫變化觀測；2)術(shù)后12h時(shí)IPGTT情況；3)術(shù)后14h各項(xiàng)生化指標(biāo)的檢測
　　 實(shí)驗(yàn)方法：經(jīng)下腔靜脈抽取靜脈

7、血，3000rpm離心10min，后送我院生化室。以貝克曼全自動生化分析儀進(jìn)行以下指標(biāo)的的測定：ALT、AST、Cr、BUN、CK、電解質(zhì)(K、Na、Cl、Ca)。
　　 結(jié)果：術(shù)前各組大鼠體重、肛溫、隨機(jī)血糖、IPGTT無明顯差異，提示隨機(jī)分組均衡性良好，無組間及組內(nèi)差異。術(shù)后結(jié)果提示1)手術(shù)結(jié)束時(shí)，L+R45組和L+S45組大鼠肛溫最低，L45組大鼠肛溫次之，L組和C組較術(shù)前略有降低。術(shù)后6h時(shí)L+R45組和L+S45組及L

8、45組大鼠肛溫較C組仍有不同程度的降低，12h時(shí)L+R45組體溫接近正常，但是L+S45大鼠肛溫低于術(shù)前水平。2)C組及L組IPGTT與術(shù)前相比無明顯差異，L45組、L+R45組、L+S45組均有明顯改變，其AUC依次升高，與對照組相比具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3)與C組相比，L組出現(xiàn)AST、CK升高；L45組大鼠出現(xiàn)ALT、AST、Cr、BUN、CK升高；L+R45組與L45組大鼠相比各項(xiàng)生化指標(biāo)變化更加顯著，但電解質(zhì)正常；L+S45組生化

9、各項(xiàng)指標(biāo)均與對照組和其余手術(shù)各組存在顯著差異，電解質(zhì)明顯異常。4)將所有大鼠術(shù)后12h的IPGTT曲線下糖面積進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，按照四分位數(shù)分為四個(gè)組別，通過生化指標(biāo)，比較了這四個(gè)組別器官損傷程度的區(qū)別，結(jié)果顯示，隨著AUC值的升高，大鼠生化指標(biāo)異常程度均明顯加重。5)通過二元線性回歸分析提示低體溫及電解質(zhì)紊亂均對術(shù)后IPGTT異常有影響。
　　 結(jié)論：1、海戰(zhàn)傷大鼠的低體溫狀態(tài)及高滲性水電解質(zhì)紊亂均是IPGTT異常的獨(dú)立影響因素；<

10、br>　　 2、IPGTT異常與海戰(zhàn)傷各器官損害程度密切相關(guān)，可以作為傷情判斷的一項(xiàng)指標(biāo)；
　　 3、海戰(zhàn)傷大鼠發(fā)生低體溫及高滲性水電解質(zhì)紊亂是加重傷后器官功能損害的可能原因。
　　 第三部分海戰(zhàn)傷大鼠傷后12小時(shí)肝臟胰島素抵抗機(jī)制的研究
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^檢測腹部開放傷45min和腹部開放合并海水浸泡45min大鼠傷后12h時(shí)肝臟組織的IR，IRS-1的表達(dá)水平及磷酸化水平，探討海戰(zhàn)傷大鼠糖耐量異常是否由于

11、胰島素信號通路活性改變所致，以及胰島素信號通路活性改變的可能原因。
　　 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：成年雄性SD大鼠，18只，體重220-250g。隨機(jī)分為3組，每組6只。分別為對照組(C組)，腹部開放傷45min組(L45組)，腹部開放合并海水浸泡45min組(L+S45組)。12h時(shí)用western blot法檢測肝臟IR，IRS-1，IRS-1酪氨酸磷酸化以及絲氨酸磷酸化表達(dá)水平。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：將3組大鼠中的每組分為門靜脈注射

12、胰島素組和非注射組，其中胰島素組用0.4ml的0.9％氯化鈉稀釋5U胰島素后由大鼠門靜脈注入，對照組僅注射0.4ml的0.9％氯化鈉，等待1min取下肝臟放入液氮中。實(shí)驗(yàn)時(shí)從液氮中取出組織進(jìn)行研磨，提取總蛋白后進(jìn)行western blot檢測。
　　 結(jié)果：1、各組大鼠術(shù)后肝臟IR表達(dá)水平無明顯差異。2、各組大鼠術(shù)后肝臟IRS-1表達(dá)水平無明顯差異。3、各組大鼠術(shù)后肝IRS-1酪氨酸酸酸化水平表達(dá)有差異：對照組，L45組和L+S

13、45組酪氨酸磷酸化水平依次降低。4、各組大鼠術(shù)后肝臟IRS-1絲氨酸酸化水平表達(dá)有差異：對照組，L45組和L+S45組絲氨酸磷酸化水平依次升高。
　　 結(jié)論：(1)L+S45大鼠和L45組大鼠在12h時(shí)IR，IRS-1總蛋白表達(dá)水平無明顯異；
　　 (2)兩組大鼠均會出現(xiàn)IRS-1酪氨酸磷酸化水平降低，其中L+S45明顯降低，說明胰島素信號通路出現(xiàn)異常，表現(xiàn)為受體后水平異常糖，這提示糖耐量異?？赡苁怯捎诎l(fā)生了胰島素抵抗，