二妙丸干預濕熱體質(zhì)的臨床試驗及其血漿代謝組學機制研究.pdf

1、背景:
　　中醫(yī)學認為，中醫(yī)體質(zhì)與健康狀態(tài)密切相關，體質(zhì)類型決定對某些致病因子的易感性及所產(chǎn)生疾病類型的傾向性。濕熱體質(zhì)是目前公認的體質(zhì)九分法中偏頗體質(zhì)的一種，是以濕熱內(nèi)蘊為主要特征的體質(zhì)狀態(tài)，其常表現(xiàn)為面垢油光，易生痤瘡，口苦口干，身重困倦，大便黏滯不暢或燥結(jié)，小便短黃，男性易陰囊潮濕，女性易帶下色黃或異味，舌質(zhì)偏紅，苔黃膩，脈滑數(shù)等。一項全國的調(diào)查表明，濕熱體質(zhì)占9.08％，現(xiàn)患率居8種偏頗體質(zhì)的第二位，與消化、呼吸、泌尿等多

2、系統(tǒng)疾病有相關性。兇此，了解濕熱體質(zhì)的發(fā)生機制，以及如何改變濕熱體質(zhì)，防止疾病的發(fā)生具有重要意義。
　　濕熱體質(zhì)的發(fā)生原因多來源于中醫(yī)辨證分析或橫斷面流行病學調(diào)查，結(jié)果表明，除因氣候等而外感濕熱外，與現(xiàn)代人生活、學習壓力大，憂愁思慮，飲食不調(diào)，久坐、缺乏運動，導致耗傷心神，脾氣郁結(jié)，肝疏泄失常。進而銷鑠腎陰，相火妄動，遏制脾陽，生痰化熱有很大關系。對濕熱體質(zhì)的干預方面，目前主要從飲食調(diào)養(yǎng)、生活起居、體育鍛煉、情志調(diào)攝、藥物調(diào)理5個

3、方而進行，但都僅停留于中醫(yī)辨證論治，缺乏隨訪，并未進行臨床試驗研究，各種干預效果也均缺乏客觀的依據(jù)。因此，從客觀的評價依據(jù)出發(fā)，進行濕熱體質(zhì)中藥干預的隨機、對照臨床研究，同時進行濕熱體質(zhì)形成及其干預的機制進行研究，是十分有必要的。
　　二妙丸為元·補陰派朱丹溪所著《丹溪心法》治療濕熱之證的常用方藥，由黃柏、蒼術組成，功效清熱燥濕，堅陰補腎，健脾升陽，腎水足則心火降，心火降則肺金不熱，肺金不熱自可制約肝木，肝木得制即不得乘脾土，緊合

4、濕熱體質(zhì)的病因病機?，F(xiàn)代藥理學研究表明，二妙丸主要含小檗堿、黃柏、木蘭堿、倍半萜類和聚乙烯炔類成分，全方具有抗菌、抗氧化、降血糖、調(diào)節(jié)免疫、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等作用。用于改善濕熱體質(zhì)的臨床表現(xiàn)非常適合。
　　代謝組學通過組群指標分析，進行高通量檢測和數(shù)據(jù)處理，研究生物體或組織細胞系統(tǒng)的動態(tài)代謝變化，特別是對內(nèi)源代謝、遺傳變異、環(huán)境變化乃至各種物質(zhì)進入代謝系統(tǒng)的特征和影響的學科。本課題組應用代謝組學方法初步探討了

5、濕熱體質(zhì)的尿液代謝物組變化，結(jié)果表明，在疲勞型亞健康人群中，與平和質(zhì)比較，濕熱質(zhì)的代謝產(chǎn)物有明顯差異的有:表達升高的有肌酸酐、α-酮戊二酸、輔酶Q、三磷酸甘油酸、丙氨酸，表達降低的有腺苷、香草基杏仁酸。這些代謝產(chǎn)物與三羧酸循環(huán)、糖、脂質(zhì)、氨基酸循環(huán)等多個代謝相關。
　　因此，本論文擬選用二妙丸對廣東地區(qū)大學生人群濕熱體質(zhì)者進行干預，進行隨機、對照的臨床試驗研究，并運用1H-NMR技術探討濕熱體質(zhì)及其干預的代謝機制，為濕熱體質(zhì)的臨床

6、干預提供一定的客觀依據(jù)。
　　目的:
　　評價二妙丸干預濕熱體質(zhì)的臨床療效，探討濕熱體質(zhì)及其用二妙丸干預的代謝組學機制。
　　方法:
　　通過本課題組研制的自測健康量表《亞健康評定量表》和《中醫(yī)體質(zhì)分類和判定表》、臨床體檢報告進行健康狀況判斷，納入符合標準的健康或亞健康人平和體質(zhì)、單純濕熱體質(zhì)大學生，將濕熱體質(zhì)人群隨機分為對照組和藥物干預組，對照組不給任何干預藥物，僅給予生活方式指導，干預組除給予生活方式指導外，

7、給予二妙丸口服，一次6克，一日2次，連續(xù)服用28天。試驗觀察時間點為干預前（0月）、干預后1月、干預后6月、干預后12月。
　　(1)二妙丸干預濕熱體質(zhì)的臨床試驗研究:試驗以濕熱體質(zhì)轉(zhuǎn)化分為主要評價指標，以其他體質(zhì)量表轉(zhuǎn)化分、濕熱體質(zhì)條目得分為次要療效指標，同時評價自測健康狀況，于0月、1月、6月、12月分別進行一次評價。進行統(tǒng)計分析，以明確應用中藥調(diào)理濕熱質(zhì)的臨床療效，為應用中醫(yī)藥手段干預中醫(yī)偏頗體質(zhì)提供科學依據(jù)。
　　(

8、2)濕熱體質(zhì)形成及其干預的代謝組學機制:選用平和體質(zhì)人群和濕熱體質(zhì)干預前人群（對照組和干預組），濕熱體質(zhì)對照組干預前后人群，濕熱體質(zhì)干預組干預前后人群，清晨空腹抽血后提取血漿-20℃凍存。血漿室溫下解凍，離心（14000×g,10min，4℃），取上清液0.3ml，加入0.1ml的重水和0.2ml PBS緩沖溶液，混勻后轉(zhuǎn)入5mm核磁管進行代謝組學測試。應用核磁共振氫譜技術(1H-NMR)，獲取平和體質(zhì)、濕熱體質(zhì)干預前后的原始代謝指紋圖

9、譜信息，采用MestReNova5.3軟件進行代謝圖譜預處理，對各分段積分值進行歸一化處理。所得數(shù)據(jù)輸出并轉(zhuǎn)換到Excel格式并導入軟件Simca-P12.0.1.0(Umetrics AB，Sweden)中進行多元統(tǒng)計分析。通過主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判別分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)等模式識別方法進行數(shù)據(jù)處理，得到兩組血漿代謝物概況，進行比較。在OPLS-DA模型中提取VIP值，再結(jié)合歸一化

10、積分值篩選出平和體質(zhì)組合濕熱體質(zhì)組、濕熱體質(zhì)干預前后血漿有差異的代謝物（VIP值＞1，兩組歸一化分值統(tǒng)計學比較P＜0.05的變量作為差異性代謝產(chǎn)物，即潛在分子標志物），然后結(jié)合臨床癥狀、體檢報告、數(shù)據(jù)庫(人類代謝產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫http://www.hmdb.ca)和文獻進行代謝物鑒定，并分析相關代謝途徑變化，從而揭示濕熱體質(zhì)的形成機制、二妙丸干預濕熱體質(zhì)的療效作用機制。統(tǒng)計分析采用SPSS13.0，歸一化積分值（均數(shù)±標準差表示）比較采取兩

11、獨立樣本t檢驗。
　　結(jié)果:
　　本研究共納入單純濕熱體質(zhì)88例（隨機分為干預組和對照組各44例），脫失或者剔除9人，共79例完成研究，男30人，女49人，平均年齡(19.51±1.49)歲。其中濕熱干預組42例，對照組37人，兩組納入對象在年齡、性別組成、身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、健康和亞健康比例上比較均無顯著性差異(P＞0.625)。
　　1.二妙丸干預濕熱體質(zhì)的臨床試驗研究
　　(1)不同時間點健康促進生活方

12、式得分
　　經(jīng)重復測量方差分析，結(jié)果顯示健康促進生活方式得分組間無顯著性差異(F=0.863，P=0.356)，而不同時間點之間的差異有顯著性(F=11.421，P=0.000)，分組和時間之間無交互效應（F=0.613，P=0.607），隨著時間的推移，對照組和干預組健康促進生活方式得分均好轉(zhuǎn)。
　　(2)不同時間點濕熱體質(zhì)量表轉(zhuǎn)化分
　　經(jīng)重復測量方差分析，結(jié)果顯示組間濕熱體質(zhì)轉(zhuǎn)化分差異有顯著性(F=6.141，P

13、=0.015)，不同時間點差異也有顯著性(F=19.128，P＜0.001)，分組和時間之間無交互效應（F=1.523，P=0.217）。干預前，兩組之間轉(zhuǎn)化分無統(tǒng)計學差異（F=0.043，P=0.513）;干預后兩組濕熱體質(zhì)轉(zhuǎn)化分均下降，兩組在干預后1個月、6個月濕熱體質(zhì)轉(zhuǎn)化分差異有統(tǒng)計學意義(P=0.033，0.007)，干預12個月后，干預組濕熱體質(zhì)轉(zhuǎn)化分有回升的趨勢，和對照組之間無顯著性差異(F=2.656，P=0.113)。<

14、br>　　2.濕熱體質(zhì)干預的血漿代謝組學機制研究
　　(1)濕熱體質(zhì)與平和體質(zhì)血漿1H-NMR分析
　　本實驗將平和體質(zhì)組(10人)和濕熱體質(zhì)組干預前(20人)作為研究對象進行建模，采用PCA、PLS-DA方法分別進行數(shù)據(jù)處理和模式識別后，濕熱體質(zhì)組和平和體質(zhì)組各自集中，兩組可區(qū)分。
　　(2)生活方式干預前后濕熱體質(zhì)的血漿1 H-NMR分析
　　本實驗將濕熱體質(zhì)對照組10人干預前后作為研究對象進行建模，采用PC

15、A、PLS-DA方法分別進行數(shù)據(jù)處理和模式識別后，濕熱體質(zhì)對照組干預前后樣本各自集中，可區(qū)分。進一步用OPLS-DA模型處理數(shù)據(jù)后，兩組樣本集中趨勢更加顯著，分類效果更好。
　　結(jié)論:
　　1、二妙丸干預濕熱體質(zhì)的臨床試驗表明，健康促進生活方式和結(jié)合二妙丸的干預對大學生濕熱體質(zhì)的改善都可以起到明顯的效果，可使整個體質(zhì)向平和體質(zhì)轉(zhuǎn)化，生活方式起效較為緩慢;加上藥物干預后，短期內(nèi)即可改善濕熱體質(zhì)狀態(tài)，且效果更好，長期隨訪也表明療

16、效顯著。
　　2、在癥狀改善上，單純健康生活方式干預濕熱體質(zhì)主要體現(xiàn)在面鼻部油膩或油光發(fā)亮、容易生痤瘡或瘡癤兩個癥狀，而加上二妙丸干預對口苦或口中異味、帶下色黃或異味、大便粘滯不爽/解不盡、小便發(fā)熱或色濃也有明顯改善。
　　3、健康促進生活方式和結(jié)合二妙丸干預均可以改善自測健康狀況，主要體現(xiàn)在牛理健康方面，單純生活方式干預對妥善處理不愉快的事、人際關系滿意度、自我滿意度、新環(huán)境適應等社會適應的干預有效果，加上二妙丸干預對緊張

17、、抑郁、缺乏安全感、害怕、孤獨、多疑等心理癥狀方面的干預效果較明顯。
　　4、濕熱體質(zhì)的形成可能與三羧酸循環(huán)、脂肪酸代謝、纈氨酸/亮氨酸/異亮氨酸降解、糖異生、丙酮酸代謝、鳥氨酸循環(huán)、天冬氨酸代謝、膽汁酸合成、嘌呤嘧啶代謝、精氨酸和脯氨酸代謝、甘氨酸和絲氨酸代謝、甜菜堿代謝、氨回收、氨基糖代謝等多個代謝通路相關。最主要涉及的是三大能量代謝途徑的旺盛，炎性/免疫反應增強，中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，肌肉疲勞，細胞滲透性增強，以及胃腸道功能紊亂