右歸丸干預(yù)老齡腎陽虛體質(zhì)分子調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討右歸丸對(duì)老齡腎陽虛體質(zhì)干預(yù)的分子調(diào)控機(jī)制，為臨床上腎陽虛的防治以及右歸丸的運(yùn)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：（1）采用腎陽虛證辨證因子評(píng)分細(xì)則表，對(duì)右歸丸（9g/次，日三次）治療28天的老齡腎陽虛體質(zhì)者進(jìn)行半定量的療效評(píng)價(jià)。
　?。?）采用miRNA表達(dá)譜芯片技術(shù)對(duì)老齡腎陽體質(zhì)者治療前（陽虛組）、治療后（治療組）、健康對(duì)照組這三組的miRNAs進(jìn)行檢測，并比較分析三組中差異表達(dá)miRNAs。
　?。?）根據(jù)差異表

2、達(dá)miRNAs在三組中具體表達(dá)量的改變、結(jié)合中醫(yī)腎陽虛衰和Pubmed中文獻(xiàn)報(bào)道的相關(guān)性，篩選出目的miRNAs，并采用qRT-PCR技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證分析。
　?。?）對(duì)篩選出的目的miRNAs，通過TargetScan軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測，以Total context+scores<-0.6core，Aggregate PCT>0.8為靶基因篩選標(biāo)準(zhǔn)。
　?。?）采用焦磷酸測序技術(shù)對(duì)目的miRNAs預(yù)測的靶基因和前期篩選的腎陽

3、虛免疫相關(guān)基因（共10條基因）的甲基化水平進(jìn)行檢測，并比較分析三組中甲基化水平差異的基因。
　?。?）采用qRT-PCR技術(shù)對(duì)目的miRNAs預(yù)測的靶基因和前期篩選的腎陽虛免疫相關(guān)基因（共10條基因）進(jìn)一步驗(yàn)證分析。
　　結(jié)果：（1）右歸丸對(duì)老齡腎陽虛體質(zhì)干預(yù)有效，尤其以其“腰膝酸痛”、“畏寒怕冷”、“四肢發(fā)冷”、“腰背發(fā)冷”、“小便頻多”的癥狀改善明顯，以“下肢水腫”、“大便溏稀”、“痰白清稀”改善不明顯。
　?。?

4、）miRNA表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示陽虛組與健康組共有63條差異表達(dá)miRNAs，陽虛組與治療組共有6條差異表達(dá)miRNAs，治療組與健康組共有50條差異表達(dá)miRNAs。
　?。?）共篩選出6條miRNAs為目的miRNAs。qRT-PCR統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示5條miRNAs有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中在右歸丸干預(yù)后，有2條基因的表達(dá)存在差異。
　　（4）通過目的miRNAs的靶基因預(yù)測共獲得6條基因。
　　（5）焦磷酸測序統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示4條

5、基因有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中在右歸丸干預(yù)后，有3條基因發(fā)生了甲基化增強(qiáng)或去甲基化的效應(yīng)。
　?。?）10條基因的qRT-PCR統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示6條基因有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：（1）右歸丸通過溫補(bǔ)腎陽，填精益髓的功用對(duì)“寒象”和“精虧”改善明顯，但在調(diào)節(jié)機(jī)體水液方面有所欠缺；同年齡段健康者從癥狀上提示亦存在一定程度的腎陽不足。
　?。?）老齡腎陽虛體質(zhì)可能多與腫瘤發(fā)生、腦部功能障礙或疾病、心臟血管功能或疾病、情志疾病、生殖功能或

6、疾病、衰老等相關(guān)，體現(xiàn)了腎陽虛衰，推動(dòng)氣化不足、藏精化精無力及心腎相關(guān)、腦腎相關(guān)的特點(diǎn)。
　?。?）右歸丸可能通過調(diào)節(jié)miRNAs的表達(dá)和DNA甲基化修飾的雙重機(jī)制調(diào)控BMP7、DICER1、NF1、FLT1的表達(dá)，AXIN1和SSTR5可能是其發(fā)揮間接作用的靶點(diǎn)。
　?。?）老齡腎陽虛體質(zhì)具有相對(duì)穩(wěn)定性，徹底改變可能需要一個(gè)長期的過程。本次研究提示右歸丸通過溫補(bǔ)腎陽，填精益髓，可能降低了老齡腎陽虛體質(zhì)相關(guān)腫瘤、功能障礙及疾