RASSF7在自體移植靜脈組織中表達變化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　作為當(dāng)代全球致死致殘性疾病的主要組成部分，動脈硬化閉塞性疾病(Arteriosclerotic disease，AD)在我國的發(fā)病呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。旁路移植術(shù)是治療冠狀動脈及下肢動脈等周圍動脈缺血性疾病的有效方法，但術(shù)后血管再狹窄嚴重影響了遠期療效，高達40％患者發(fā)生遠期靜脈血管再狹窄導(dǎo)致的狹窄。移植靜脈血管再狹窄是一個多因素的過程，目前病因仍不清，血管平滑肌細胞（Vascular smooth muscle cel

2、l，VSMC）的增殖和遷移是其中重要的病理變化，和大多數(shù)細胞相似，它的增殖也受控于細胞周期調(diào)控蛋白。RASSF7基因是RAS原癌基因的效應(yīng)蛋白RASSF家族中的成員，它于動物中廣泛存在，并且在胚胎的發(fā)育及細胞周期調(diào)控和增殖、凋亡中有重要作用。本文分別在基因和蛋白水平檢測了RASSF7在自體移植靜脈中隨時間的變化情況，并檢測細胞增殖指標(biāo)PCNA蛋白水平表達的變化，探討RASSF7與血管組織中VSMC增殖及移植血管再狹窄的發(fā)生之間是否存在關(guān)

3、系。
　　方法：
　　使用SD大鼠制作頸總靜脈-腎下腹主動脈移植模型60只，正常飼養(yǎng)至術(shù)后7天、14天和28天時間點各20只處死，取移植后的靜脈及對側(cè)正常頸總靜脈作為對照。HE染色觀察形態(tài)變化，Real-Time PCR檢測RASSF7在基因水平的變化，免疫組化染色與Western-blot蛋白印跡檢測RASSF7在蛋白水平的表達變化趨勢，Western-blot檢測PCNA在蛋白水平表達及PCNA與RASSF7表達間關(guān)系。

4、
　　結(jié)果：
　　1、組織學(xué)檢查結(jié)果
　　HE染色結(jié)果可見:正常靜脈的內(nèi)膜僅由一層內(nèi)皮細胞組成，而中膜為2至3層血管平滑肌細胞;在血管移植術(shù)后的靜脈隨時間延長，內(nèi)膜和中膜的結(jié)構(gòu)逐漸增厚，在14-28天時達到高峰。免疫組織化學(xué)染色可見:正常靜脈中RASSF7陽性細胞很少，在移植術(shù)后7天靜脈內(nèi)開始有表達，14天時陽性細胞大量出現(xiàn)，28天達到高峰。正常靜脈及術(shù)后7、14、28天的RASSF7陽性細胞率分別為(4.7±1.23

5、)％、(19.6±1.67)％、(46.4±1.54)％、(58.5±2.87)％。術(shù)后7、14、28天與正常靜脈陽性率的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2、Western-blot檢測結(jié)果
　　正常靜脈中RASSF7蛋白的表達量很少，術(shù)后移植血管中RASSF7蛋白的表達增多并呈逐漸表達逐漸增加的趨勢，符合組織學(xué)檢測結(jié)果。正常靜脈，術(shù)后7、14、28天的蛋白光密度值為0.254±0.017、0.425±0.021、0

6、.528±0.023、0.679±0.019，PCNA的光密度值分別為0.156±0.012、0.228±0.015、0.371±0.011、0.404±0.013，相關(guān)性分析結(jié)果顯示RASSF7蛋白與PCNA蛋白的表達隨時間變化成正相關(guān)(r=0.9173，P＜0.01)。
　　3、Real-time PCR檢測結(jié)果
　　Real-time PCR檢測結(jié)果可見:正常靜脈中RASSF7 mRNA表達量很少，術(shù)后7天、14天、2