泛素蛋白酶體系統(tǒng)在氧化低密度脂蛋白誘導人臍靜脈內皮細胞損傷中的作用及其與自噬間的關系研究.pdf

1、目的:
　　觀察泛素蛋白酶體系統(tǒng)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)損傷中的作用，探討其初步機制，并研究其與自噬及凋亡之間的關系。
　　方法:
　　1.運用不同濃度及時間點的ox-LDL處理HUVECs，采用免疫印跡技術檢測泛素、及E1泛素激活酶、E2泛素結合酶、E3泛素連接酶的表達，觀察ox-LDL對HUVECs泛素蛋白酶體水平的影響。2.在自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）及泛素

2、蛋白酶體抑制劑MG-132的干預下，采用免疫印跡技術檢測泛素、自噬標記蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表達變化，觀察在ox-LDL損傷HUVECs過程中泛素蛋白酶體途徑與自噬之間的關系。3.運用不同濃度及時間點的ox-LDL處理HUVECs，采用免疫印跡技術檢測溶酶體酶(cathepsin B、cathepsin D)的表達，觀察ox-LDL對HUVECs溶酶體酶水平的影響。4.在泛素蛋白酶體抑制劑MG-132的干預下，采用免疫印跡技術檢測溶酶

3、體酶（cathepsin B、cathepsin D）的表達變化，進一步探討ox-LDL損傷HUVECs過程中泛素蛋白酶體途徑與自噬、凋亡之間的關系。
　　結果:
　　1.ox-LDL作用能上調HUVECs的泛素蛋白(Ubiquitin)表達，并呈劑量依賴性。免疫印跡技術結果顯示，ox-LDL(100μg/ml)上調HUVECs中Ubiquitin表達的作用在12h和24h出現(xiàn)兩個高峰。ox-LDL(100μg/ml)作用1

4、2h和24h也能顯著上調HUVECs中E1、E2、E3酶的表達;2.3-MA能抑制ox-LDL引起的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達上調，同時對HUVECs Ubiquitin的表達無明顯影響。MG-132在抑制ox-LDL上調Ubiquitin的同時能上調HUVECs LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表達。3.ox-LDL作用12h能被HUVECs大量吞噬，并促進HUVECs增殖，該作用能被3-MA及MG-132明顯抑制。4.ox-LDL(100μ

5、g/ml)作用能上調HUVECs中cathepsin B和cathepsin D表達，此作用在24小時達到高峰。5.MG-132可抑制ox-LDL介導的cathepsin B和cathepsin D的表達上調。
　　結論:
　　ox-LDL能促進HUVECs增殖，并誘導其發(fā)生自噬和壞死。ox-LDL對HUVECs的損傷與其被細胞吞噬后的降解障礙有關，亦能誘導細胞凋亡，其可通過泛素蛋白酶體及自噬兩條途徑降解，泛素蛋白酶體為首要