雞白痢沙門(mén)氏菌部分基因的必需性鑒定.pdf

1、雞白痢和鼠傷寒沙門(mén)氏菌均為沙門(mén)氏菌屬成員，但二者有著明顯的宿主嗜性和致病性差異，前者為僅感染雞的專嗜性沙門(mén)氏菌，致死率高，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的危害極大;而后者可感染人和多種動(dòng)物，是重要的人畜共患病原。目前對(duì)廣嗜性沙門(mén)氏菌的研究較為廣泛和深入，但對(duì)專嗜性的雞白痢沙門(mén)氏菌研究相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)照鼠傷寒沙門(mén)氏菌的110個(gè)必需基因，運(yùn)用插入復(fù)制突變法(IDM)的方法對(duì)雞白痢沙門(mén)氏菌中的對(duì)應(yīng)基因的必需性進(jìn)行了初步的鑒定在KnuthK等鑒定出的257個(gè)鼠傷寒

2、沙門(mén)氏菌必需基因中，除去本實(shí)驗(yàn)室林蕾已鑒定完成的109個(gè)及部分有關(guān)rRNA、tRNA功能的必需基因，我們從余下基因中選取110個(gè)作為本研究的目的基因。從NCBI上獲取目的基因序列并設(shè)計(jì)引物，以雞白痢沙門(mén)氏菌基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增片段的大小集中在300-700bp間。將目的片段分別克隆入pIDM-T質(zhì)粒后轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1感受態(tài)細(xì)胞。經(jīng)PCR和雙酶切方法鑒定陽(yáng)性克隆，抽提陽(yáng)性質(zhì)粒并電轉(zhuǎn)化雞白痢沙門(mén)氏菌CVCC527菌株，經(jīng)鑒定成

3、功獲得110個(gè)含目的基因片段的雞白痢沙門(mén)氏菌本菌株克隆。將陽(yáng)性克隆分別于30℃增菌后稀釋涂板，計(jì)數(shù)同樣菌液量在37℃條件下長(zhǎng)出的重組子數(shù)和30℃條件下長(zhǎng)出的菌落總數(shù)，并計(jì)算IPC值。根據(jù)IPC值的大小對(duì)目的基因的必需性作初步鑒定。本實(shí)驗(yàn)初步鑒定的結(jié)果為:45個(gè)為雞白痢沙門(mén)氏菌的必需基因，41個(gè)為疑似必需基因，24個(gè)為非必需基因。
　　 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用IDM方法初步鑒定出了部分雞白痢沙門(mén)氏菌必需基因，為雞白痢沙門(mén)氏菌的分子生物學(xué)研究奠