MicroRNAs在雞感染腸炎沙門氏菌中的表達(dá)調(diào)控.pdf

1、MicroRNAs（miRNAs）大小為20~25個核苷酸，存在于真核生物體內(nèi)，是一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼RNA。miRNAs通過堿基互補(bǔ)配對的方式識別靶mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。相關(guān)的研究顯示，gga-mir-1662、gga-mir-215和gga-mir-1416與雞腸炎沙門氏菌的感染相關(guān)，且gga-mir-1662與TLR1LA、gga-mir-1416與BCL1

2、0可能存在靶向關(guān)系。
　　SNP（single nucleotide polymorphism）是基因組DNA堿基的變異，在基因組中的發(fā)生頻率較高，有意義的變異會影響到基因組DNA組成元件的功能、轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA水平、蛋白的表達(dá)，進(jìn)而影響基因的功能，導(dǎo)致生物性狀改變甚至致病。因此 SNP被廣泛用于群體遺傳學(xué)研究（如生物的起源、進(jìn)化及遷移等方面），和疾病相關(guān)基因的研究，在藥物基因組學(xué)、診斷學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究中起重要作用。
　　

3、本研究從 miRNA與靶基因的表達(dá)以及 miRNA的變異兩個方面研究其在雞腸炎沙門氏菌感染中的作用機(jī)制。用腸炎沙門氏菌感染2日齡濟(jì)寧百日雞，在感染后的第1天、第3天、第7天、第14天、第21天、第28天和第35天采集空腸組織樣品，實(shí)驗(yàn)組和對照組各4只，提取組織總RNA后檢測相關(guān)microRNA和靶基因的表達(dá)量；感染后第7天取200只濟(jì)寧百日雞的盲腸內(nèi)容物和血液，分別用來檢測腸炎沙門氏菌的含量和提取基因組 DNA，設(shè)計(jì)相應(yīng)引物，擴(kuò)增 mi

4、RNA的目的片段，進(jìn)行測序、分型，對 SNP位點(diǎn)與腸道內(nèi)容物腸炎沙門氏菌含量進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。研究結(jié)果顯示：
　　1）不同的 microRNA對照組和實(shí)驗(yàn)組差異表達(dá)的時間點(diǎn)不同，gga-mir-1662和gga-mir-215在感染后的第7天達(dá)到差異表達(dá)的高峰，試驗(yàn)組的表達(dá)量分別是對照組的1.6倍和1.66倍。gga-mir-1416則在21日齡表現(xiàn)出明顯的上調(diào)表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組是對照組的1.5倍。
　　2）microRNA及其潛在靶

5、基因不是在每個時間點(diǎn)能表現(xiàn)出明顯的靶向關(guān)系，可能與機(jī)體的復(fù)雜調(diào)控有關(guān)系。感染后的第7天，gga-mir-1662明顯上調(diào)，TLR1LA明顯下調(diào)，靶向關(guān)系明顯；gga-mir-1416與BCL10在感染后的第21天和第28天差異顯著，但不能表現(xiàn)出明顯的靶向關(guān)系。
　　3）不同的 microRNA在體內(nèi)的變化趨勢不同，對照組和實(shí)驗(yàn)組表現(xiàn)出相近的表達(dá)趨勢。相對于各個不同時間點(diǎn)的表達(dá)，總體而言，感染后的第1天、第3天、第7天、第14天屬于

6、高表達(dá)時間點(diǎn)，而第21天、第28天、第35天屬于低表達(dá)時間點(diǎn)。
　　4）對個體分型之后與腸炎沙門氏菌含量相關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)了4個與腸炎沙門氏菌感染相關(guān)的SNP位點(diǎn)突變，分別為rs18823870、rs312707374、rs316396584、rs314185118。rs18823870位于 gga-mir-215上游， rs312707374、rs316396584、rs314185118位于gga-mir-1416上游，進(jìn)一步說明