肥胖型哮喘小鼠氧化應(yīng)激與NF-ΚB信號通路的相關(guān)性及抗氧化應(yīng)激干預(yù)的影響.pdf

1、目的：肥胖是哮喘發(fā)病的獨立危險因素，肥胖型哮喘比普通哮喘臨床癥狀重，對常規(guī)治療哮喘的藥物反應(yīng)差，但其機(jī)制尚未闡明。哮喘和肥胖患者都存在氧化應(yīng)激水平的增高，氧化應(yīng)激可能是聯(lián)系二者的重要橋梁。過高的氧化應(yīng)激有可能是肥胖型哮喘癥狀重，難控制的原因之一。氧化應(yīng)激可以激活NF-κB信號通路，NF-κB活化后其調(diào)控的炎性因子釋放增多，又可以加重氧化應(yīng)激。本實驗建立了肥胖型哮喘小鼠動物模型，檢測其肺組織氧化應(yīng)激和NF-κB信號通路的情況，探討它們在肥

2、胖型哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用，觀察抗氧化應(yīng)激干預(yù)后的效果，旨在為肥胖型哮喘的治療開辟新的思路。
　　方法：⑴高脂飼料喂養(yǎng)，OVA致敏激發(fā)建立肥胖型哮喘模型，正常體重哮喘小鼠模型做為對照。N-乙酰半胱氨酸灌胃干預(yù)哮喘小鼠，布地奈德混懸液霧化做為治療對照。⑵觀察所有小鼠臨床癥狀，肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞總數(shù)，細(xì)胞分類，肺病理改變。⑶檢測小鼠肺組織、BALF氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS和MDA，抗氧化應(yīng)激能力 GSH和GSH-PX。⑷EMSA方法檢

3、測小鼠肺組織NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性，real-time PCR的方法檢測小鼠肺組織NF-κB mRNA的表達(dá)。western-blot方法檢測小鼠肺組織NF-κB的抑制蛋白IκB-α的表達(dá)，IκB-α的主要激酶IKK-β蛋白表達(dá)。5．對氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS和NF-κB轉(zhuǎn)錄活性進(jìn)行相關(guān)性分析6.用ELISA方法檢驗小鼠肺組織炎性因子TNF-α和IL-8的濃度。
　　結(jié)果：肥胖哮喘組小鼠臨床癥狀，BALF細(xì)胞總數(shù)，肺病理改變均比正常體重小

4、鼠重，N-乙酰半胱氨酸和布地奈德干預(yù)后上述病理現(xiàn)象都有所改善，布地奈德效果優(yōu)于N-乙酰半胱氨酸；兩組哮喘組小鼠肺組織、BALF氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS、MDA均明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，抗氧化應(yīng)激能力 GSH、GSH-PX均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)，而且肥胖哮喘組比正常體重哮喘組ROS、MDA的升高更明顯(P＜0.05或P＜0.01)。GSH、GSH-PX降低的更明顯(P＜0.05或P＜0.01)。N-乙酰半胱氨酸

5、和布地奈德干預(yù)后都有所改善，但是在降低ROS、MDA，提高GSH、GSH-PX方面，布地奈德效果不及N-乙酰半胱氨酸；兩組哮喘組小鼠肺組織IKK-β蛋白表達(dá)、NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性、NF-κB mRNA的表達(dá)均明顯升高(P＜0.01)，IκB-α蛋白表達(dá)降低(P＜0.01)，而且肥胖哮喘組比正常體重哮喘組IKK-β、NF-κB升高的更明顯(P＜0.01)。IκB-α降低的更明顯(P＜0.01)。N-乙酰半胱氨酸和布地奈德干預(yù)后都有所改善，

6、在改善NF-κB信號通路過度激活方面N-乙酰半胱氨酸的效果不及布地奈德。肺組織TNF-α，IL-8濃度與NF-κB的變化趨勢是一致的；肥胖哮喘組、正常體重哮喘組、布地奈德干預(yù)肥胖哮喘組、布地奈德干預(yù)正常體重哮喘組、N-乙酰半胱氨酸干預(yù)肥胖哮喘組、N-乙酰半胱氨酸干預(yù)正常體重哮喘組肺組織ROS熒光強(qiáng)度（log100）與NF-κB的激活均呈正相關(guān)（均P<0.05），但是在肥胖陰性對照組和正常體重陰性對照組均無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。