氧化應(yīng)激刺激下小鼠胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源的exosomes抗氧化應(yīng)激能力研究.pdf

1、研究背景:糖尿病的發(fā)病率及患病率逐年升高,成為威脅人民健康的重大社會(huì)問(wèn)題。胰島β細(xì)胞氧化受損、功能障礙是該病主要的發(fā)病機(jī)制,然而,胰島是高度血管化的微器官,越來(lái)越多的研究提示胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞(isletmicrovascular endothelial cells,IMECs)的氧化損傷在糖尿病發(fā)病機(jī)制中起了關(guān)鍵作用。Exosomes是由多種細(xì)胞類(lèi)型均可以分泌到細(xì)胞外基質(zhì)中的一種直徑約40～100nm的膜性囊泡⑴。作為細(xì)胞間信息的傳遞

2、體,exosomes在多種病理生理?xiàng)l件下扮演了十分重要的角色。在本課題中,exosomes將作為溝通IMECs和IMECs之間的橋梁,研究IMECs在氧化應(yīng)激刺激下產(chǎn)生的exosomes對(duì)同種細(xì)胞發(fā)揮的抗氧化應(yīng)激效應(yīng)。
　　研究目的:研究氧化應(yīng)激刺激下小鼠胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞系(MS-1)來(lái)源的exosomes是否能夠增強(qiáng)MS-1細(xì)胞在相同氧化環(huán)境中的抗氧化應(yīng)激能力,為2型糖尿病重建胰島微循環(huán)完整性提供理論依據(jù)。
　　研究方法

3、:采用超速離心法分離得到MS-1細(xì)胞在非氧化應(yīng)激刺激和過(guò)氧化氫(H2O2)所致氧化刺激條件下分泌的exosomes(N-exo和O-exo),純化并鑒定。實(shí)驗(yàn)組予以不同濃度(0,5,10,50,100μ g/mL)exosomes作用于MS-1細(xì)胞一段時(shí)間后,以既定濃度H2O2誘導(dǎo)MS-1細(xì)胞損傷。應(yīng)用CCK-8法和AnnexinV-PI染色流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)比較各組細(xì)胞活力的差異,通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Caspase-3及B

4、cl-2 mRNA的水平變化。
　　研究結(jié)果:在數(shù)量上,O-exo較N-exo獲得量少(前者平均為0.3ug/106細(xì)胞,后者平均為0.6ug/106細(xì)胞,P＜0.05)。50μg/mL O-exo實(shí)驗(yàn)組較N-exo和其他對(duì)照組有明顯抑制MS-1細(xì)胞凋亡的作用,AnnexinV-PI染色檢測(cè)該組細(xì)胞凋亡率約下降6.1%,CCK-8法檢測(cè)該組OD值明顯升高(p＜0.01)。Caspase-3 mRNA表達(dá)水平在加入O-exo數(shù)小時(shí)后