兩種鋅源對(duì)奶山羊鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SLC39A1-3表達(dá)的影響.pdf

1、為了研究日糧中分別添加兩種不同的鋅源后對(duì)奶山羊鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響,本試驗(yàn)隨機(jī)挑選9只2.5～3歲健康且體況相似的關(guān)中奶山羊,并隨機(jī)分為硫酸鋅(ZnSO4)組、氨基酸鋅(Zn-AA)組和對(duì)照組。分別飼喂Zn濃度為60mg/kg的ZnSO4日糧和Zn-AA日糧,以及無(wú)添加鋅日糧,并同時(shí)給予Zn濃度為60mg/kg的ZnSO4水和Zn-AA水,以及去離子水。飼料和飲用水均任動(dòng)物自由采食。一周后屠宰取組織樣品,液氮中保存。此后將人、小鼠、牛和

2、綿羊ZIP鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Ⅱ亞家族的ZIP1～3等3個(gè)鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因SLC39A1～3的序列對(duì)山羊的ESTs和UniGene進(jìn)行搜索,拼接后設(shè)計(jì)引物通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)對(duì)奶山羊的這3個(gè)基因進(jìn)行克隆,并對(duì)其在奶山羊23種組織中的分布進(jìn)行檢測(cè),再通過(guò)熒光定量PCR對(duì)飼喂兩種不同鋅源后這3種基因在奶山羊的真胃、十二指腸近段、中段、遠(yuǎn)段、空腸、回腸、肝臟和腎臟等8種鋅主要消化吸收部位中的表達(dá)情況進(jìn)行初探。主要結(jié)果如下:
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3、、奶山羊鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SLC39A1的克隆與組織分布
　　 克隆的奶山羊SLC39A1基因包含一個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框架(open reading frame,ORF),長(zhǎng)度為972bp,編碼由324個(gè)氨基酸殘基組成的ZIP1蛋白,其中酸性氨基酸為42個(gè),堿性氨基酸為24個(gè),分子量為34.18 kDa,等電點(diǎn)為5.567。該基因在真胃、十二指腸近段、十二指腸中段、十二指腸遠(yuǎn)端、空腸、回腸、肝臟、腎臟、脾臟、肺臟、胰臟、肌肉、大腦、瘤

4、胃、網(wǎng)胃、瓣胃、直腸、結(jié)腸、盲腸、皮膚和乳腺21種組織中有分布。
　　 2、奶山羊鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SLC39A2的克隆與組織分布
　　 克隆的奶山羊SLC39A2基因包含一個(gè)完整的ORF,長(zhǎng)度為927bp,編碼由309個(gè)氨基酸殘基組成的ZIP2蛋白,其中酸性氨基酸為39個(gè),堿性氨基酸為23個(gè),分子量為32.79 kDa,等電點(diǎn)為5.07。該基因在真胃、十二指腸近段、十二指腸遠(yuǎn)端、空腸、回腸、肝臟、脾臟、肺臟、胰臟、肌肉、大

5、腦、瘤胃、網(wǎng)胃、瓣胃、直腸、結(jié)腸、盲腸、皮膚、睪丸和乳腺20種組織中有分布。
　　 3、奶山羊鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因SLC39A3的克隆與組織分布
　　 克隆的奶山羊SLC39A3基因包含一個(gè)完整的ORF,長(zhǎng)度為942bp,編碼由314個(gè)氨基酸殘基組成的ZIP3蛋白,其中酸性氨基酸為39個(gè),堿性氨基酸為31個(gè),分子量為33.97 kDa,等電點(diǎn)為5.854。該基因在真胃、十二指腸近段、十二指腸中段、十二指腸遠(yuǎn)端、空腸、同腸、肝臟

6、、脾臟、肺臟、胰臟、肌肉、大腦、瘤胃、網(wǎng)胃、瓣胃、直腸、結(jié)腸、盲腸、皮膚、睪丸和乳腺21種組織中有分布。
　　 4、SLC39A1 mRNA在不同鋅處理組中的表達(dá)變化
　　 在十二指腸遠(yuǎn)段中ZnSO4組奶山羊的SLC39A1 mRNA的表達(dá)量顯著升高,Zn-AA組也有所升高,但差異不顯著；在十二指腸中段中兩個(gè)試驗(yàn)組的奶山羊SLC39A1 mRNA的表達(dá)量均有所下降,差異不顯著；而在其余組織中兩個(gè)加鋅試驗(yàn)組奶山羊SLC39

7、A1 mRNA表達(dá)量均有所升高,差異也不顯著。
　　 5、SLC39A2 mRNA在不同鋅處理組中的表達(dá)變化
　　 在真胃中Zn-AA組奶山羊的SLC39A2 mRNA的表達(dá)量顯著降低,而ZnSO4組較對(duì)照組略有升高,但差異不顯著；在十二指腸中段中ZnSO4組的奶山羊SLC39A2 mRNA的表達(dá)量顯著升高,Zn-AA組有所升高,差異不顯著；在回腸中,ZnSO4組SLC39A2 mRNA表達(dá)量有所升高,差異不顯著,Zn-

8、AA組有所降低,差異也不顯著,但是兩個(gè)加鋅試驗(yàn)組間差異顯著；在肝臟中,ZnSO4組顯著降低,Zn-AA組顯著升高,兩個(gè)加鋅試驗(yàn)組間差異也顯著；在十二指腸近段中,兩個(gè)加鋅試驗(yàn)組均有所降低,但是差異均不顯著；而在其余組織中試驗(yàn)組間SLC39A2 mRNA表達(dá)量基本沒(méi)有變化。
　　 6、SLC39A3mRNA在不同鋅處理組中的表達(dá)變化
　　 在十二指腸近段中兩個(gè)加鋅試驗(yàn)組SLC39A3 mRNA表達(dá)量均顯著降低；在十二指腸中段