雞奇異變形桿菌和沙門菌16SrRNA甲基化酶基因的檢測及擴散機制.pdf

1、質粒介導的16S rRNA甲基化酶是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種耐藥決定因子,可導致革蘭氏陰性細菌對4,6-二取代基-脫氧鏈霉胺類氨基糖苷類藥物(如慶大霉素、阿米卡星等)高水平耐藥。因此,深入了解16s rRNA甲基化酶基因在規(guī)模化雞場腸桿菌科細菌的流行狀況及擴散機制,在獸醫(yī)臨床抗感染治療領域上具有重要的實際意義。
　　 本研究自2009年5月-2010年11月從河南省4個規(guī)模化養(yǎng)雞場采集樣品391份(包括肛門拭子等)。經(jīng)細菌分離、培養(yǎng)、

2、API細菌鑒定系統(tǒng)和PCR鑒定,共分離奇異變形桿菌20株,沙門菌21株。首先,對這些菌株進行常用抗菌藥物的藥敏試驗。然后,在藥敏試驗的基礎上,采用PCR反應對這些菌株進行16S rRNA甲基化酶基因的檢測,初步了解16s rRNA甲基化酶基因在這些菌株中的流行情況,并同時檢測了16s rRNA甲基化酶陽性菌株攜帶ESBLs基因(TEM,SHV,CTX-M)和質粒介導的氟喹諾酮類藥物耐藥基因(qnr、qepA和aac(6)-ib)的情況。

3、最后,采用細菌質粒接合試驗(以大腸桿菌J53和EC600為受體菌)、電轉化試驗(以DH10B為受體菌)、脈沖場凝膠電泳試驗等,探索研究這些耐藥菌株16S rRNA甲基化酶基因的水平和/或垂直擴散機制。
　　 結果表明,在分離的20株奇異變形桿菌中,對常用的7種藥物均呈現(xiàn)多重耐藥,對氨基糖苷類藥物阿米卡星高水平耐藥的菌株高達100％,經(jīng)16S rRNA甲基化酶基因檢測,均為rmtB基因。在分離的21株沙門菌中,對常用的7種抗菌藥物

4、大部分敏感,僅有1株對阿米卡星高度耐藥,檢測率為4.76％,經(jīng)16s rRNA甲基化酶基因檢測,為armA基因。20株rmtB陽性菌株大多攜帶CTX-M-2和CTX-M-9組超廣譜β-內酰胺酶,其攜帶率分別為90％和35％。armA陽性菌株還同時攜帶TEM-1型、CTX-M-2組和CTX-M-9組超廣譜β-內酰胺酶基因和質粒介導的氟喹諾酮類耐藥基因qnrS、qnrB和aac(6’)-Ib-cr。
　　 對奇異變形桿菌進行多次接合

5、試驗和電轉化試驗均未成功。初步提示,垂直克隆傳播,而不是水平傳播在其16S rRNA甲基化酶耐藥基因擴散中發(fā)揮重要作用。脈沖場凝膠電泳的試驗結果進一步證實了這種情況,提示本次分離的奇異變形桿菌不同菌株間的親緣關系密切相關,可能來源于一個共同祖先。沙門菌的多次接合也未成功,其原因有待于進一步證實,但電轉化試驗成功地獲得了電轉化菌株。初步表明,其16S rRNA甲基化酶耐藥基因annA位于質粒上,可導致其水平擴散。該質粒還同時攜帶TEM-1

6、型、CTX-M-2組超廣譜β-內酰胺酶基因以及質粒介導的氟喹諾酮類耐藥基因qnrB和aac(6’)-Ib-cr。
　　 綜上所述,本研究首次進行了動物源奇異變形桿菌和沙門菌16S rRNA甲基化酶基因的流行病學檢測,并在此基礎上對其擴散機制進行了探索。首次分別在動物源奇異變形桿菌和沙門菌上分別檢測到16S rRNA甲基化酶基因rmtB和armA。初步證實,奇異變形桿菌16S rRNA甲基化酶基因rmtB的擴散機制以垂直克隆擴散為