燈盞花素對胰島素抵抗大鼠骨骼肌脂肪酸代謝的影響及作用機制.pdf

1、目的：
　　前期研究發(fā)現(xiàn)，燈盞花素對2型糖尿病及高脂血癥有明顯改善作用。本實驗通過高脂高糖喂養(yǎng)，誘導胰島素抵抗(IR)大鼠模型。通過口服糖耐量試驗，觀察空腹血糖(FBG)、空腹血清胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(IRI)，評價模型建立;燈盞花素作用2周后，檢測血清及骨骼肌中游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)含量，觀察并判定骨骼肌組織脂質沉積情況；測定骨骼肌中長鏈脂酰輔酶A(LccoAs)水平，及脂肪酸轉位酶(FAT/CD3

2、6)、肉堿脂酰轉移酶(CPT-1)蛋白水平及mRNA表達差異，探討燈盞花素對IR、骨骼肌脂質沉積及脂肪酸代謝的改善情況及作用機制。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠55只，適應性喂養(yǎng)一周，禁食12h測FBG，選正常大鼠50只。隨機分為正常組(10只)、高脂高糖組(40只)，分別喂養(yǎng)普通飼料和高脂高糖飼料；12周后，行大鼠口服糖耐量實驗(50％葡萄糖,2g/kg,灌胃)。篩選成模大鼠30只,隨機分為模型組、燈盞花素高劑量組(2

3、00mg/kg,ip)、燈盞花素低劑量組(100mg/kg,ip)，每組10只，分別給藥2周,正常組、模型組以同樣方式，給予相同劑量0.9%NaCl注射液。14周末，各組大鼠禁食12 h,尾部采血測 FBG，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，分離股四頭肌組織；離心分離血清，檢測血清中FINS水平，并評價胰島素抵抗指數(shù)；試劑盒測定血清及組織中 FFA、TG變化；冰凍切片油紅 O染色，觀察骨骼肌組織脂質沉積情況；酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清Lc

4、coAs濃度的變化；western blot觀察FAT/CD36、CPT-1在股四頭肌的蛋白表達水平；常規(guī)PCR測定FAT/CD36、CPT-1的mRNA含量。
　　結果：
　　①大鼠FBG、FINS、IRI變化：14周后，大鼠FBG、FINS、IRI，模型組均明顯高于正常組(P<0.01)；燈盞花素高、低劑量組各水平均低于模型組(P<0.01)；與低劑量組相比，高劑量組效果更顯著(P<0.01)，有明顯劑量依賴性。說明高脂

5、高糖飲食,使大鼠出現(xiàn)高血糖、高胰島素血癥，明顯出現(xiàn)IR，燈盞花素可明顯降低FBG、FINS，改善 IR。
　　②油紅 O染色結果：模型組大鼠出現(xiàn)大量的脂滴，脂肪沉積明顯(P<0.01)。燈盞花素高、低劑量組較模型組有不同程度改善(P<0.05)，高劑量組改善效果更明顯(P<0.01)。提示高脂高糖飲食使大鼠骨骼肌脂肪增多，出現(xiàn)明顯脂質沉積，燈盞花素干預后癥狀明顯改善。
　?、劢M織、血清內 FFA、TG結果：模型組血清、骨骼肌

6、內FFA、TG明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，燈盞花素高、低劑量組FFA均有明顯降低(P<0.01)；與低劑量組相比，高劑量組TG明顯降低(P<0.01)。14周喂養(yǎng)，大鼠出現(xiàn)高甘油三酯、高脂肪酸血癥，燈盞花素可顯著降低高脂血癥。
　?、芄趋兰ccoAs結果：與正常組比較，模型組大鼠 LccoAs水平明顯增加(P<0.01)；用藥后，與模型組比較，燈盞花素高、低劑量組大鼠 LccoAs水平降低(P<0.01)，高劑量組改

7、善更為明顯(P<0.01)。LccoAs為長鏈脂肪酸在細胞內的活性形式，IR大鼠LccoAs含量升高，說明細胞內攝入的長鏈脂肪酸增多，燈盞花素可以改善此酶的活性，抑制其攝入。
　　⑤FAT/CD36蛋白及 mRNA結果：FAT/CD36在股四頭肌的表達，模型組比正常組表達增多(P<0.01)；與模型組比較，燈盞花素高、低劑量組表達不同程度改變(P<0.01)，其中高劑量組表達改變最明顯(P<0.01)，且有劑量依賴性。FAT/CD

8、36介導脂肪酸進入細胞，IR大鼠FAT/CD36含量增加，說明脂肪酸攝入增多，而燈盞花素能抑制其攝入增多。
　　⑥CPT-1蛋白及mRNA結果：與正常組相比，模型組CPT-1蛋白及 mRNA表達明顯減少(P<0.01)；燈盞花素高、低劑量組相較于模型組，CPT-1蛋白及 mRNA均增加(P<0.01)。CPT-1是線粒體氧化脂肪酸的關鍵限速酶，IR大鼠CPT-1蛋白及mRNA明顯減少，脂肪酸氧化減少，而燈盞花素治療使其表達增加，脂

9、肪酸氧化增多，改善糖脂代謝紊亂。
　　結論：
　?、俑咧咛秋嬍晨梢猿晒椭埔葝u素抵抗大鼠模型。
　?、谝葝u素抵抗大鼠，血清及骨骼肌中FFA、TG明顯升高，股四頭肌出現(xiàn)明顯脂質沉積。
　?、垡葝u素抵抗大鼠模型，骨骼肌中與脂肪酸攝入相關的FAT/CD36及 LccoAs含量增加，而氧化必須的 CPT-1表達減少。
　?、軣舯K花素可降低FBG、FINS,改善IR;減少FFA、TG含量,改善骨骼肌脂質堆積情況；其