大豆油脫臭餾出物中生物活性成分綜合提取工藝研究.pdf

1、大豆油脫臭餾出物中富含生育酚、甾醇和角鯊烯等重要生物活性成分，開(kāi)展綜合提取工藝研究旨在設(shè)想建立一種優(yōu)勢(shì)增強(qiáng)，方法新穎，成本低廉，綠色環(huán)保的工業(yè)化生產(chǎn)工藝。同步檢測(cè)脫臭餾出物中生育酚、甾醇和角鯊烯含量的HPLC-DAD方法的建立，既能滿足同步檢測(cè)生育酚、甾醇和角鯊烯的需要，又能降低檢測(cè)成本，提高檢測(cè)效率。另外，產(chǎn)品開(kāi)發(fā)流程和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬定，可以為工業(yè)化生產(chǎn)提供指導(dǎo)和規(guī)定。主要結(jié)論如下:
　　1.同步檢測(cè)脫臭餾出物中生育酚、甾醇和角鯊

2、烯含量的HPLC-DAD方法的建立。通過(guò)對(duì)預(yù)處理?xiàng)l件和液相條件（流速、流動(dòng)相等）進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳同步檢測(cè)條件為:色譜柱為C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水(98∶2，v/v)、異丙醇，采用梯度洗脫，流速為1.0 mL/min，柱溫為30℃。優(yōu)化后，精度(RSD＜3.05％)、回收率(92.4-103.8％)、檢測(cè)限(0.10-0.50μg/mL)和定量限(0.50-2.50μg/mL)良好，方法有效、精確，首次實(shí)現(xiàn)了脫臭餾出物中生育酚、甾醇和

3、角鯊烯含量的同步檢測(cè)。
　　2.以提取率和產(chǎn)品純度為考察指標(biāo)，建立了脫臭餾出物中生育酚、甾醇和角鯊烯的綜合提取工藝。在獲得高純生育酚（純度＞70％）的同時(shí)，兼得植物甾醇（純度＞90％）和角鯊烯（純度＞50％）。工藝所得產(chǎn)品純度高，提取率高，綠色環(huán)保，最大程度實(shí)現(xiàn)了脫臭餾出物的綜合利用。具體包括:
　　1)改良皂化工藝:以生育酚提取率作為考察指標(biāo)，對(duì)反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、堿的加入量、氯化鋅加入量、氯化鋅加入時(shí)間、萃取溶劑進(jìn)行優(yōu)化

4、，確定了改良皂化的最佳工藝:反應(yīng)時(shí)間45 min，反應(yīng)溫度70℃，氫氧化鈉（1.5 mol/L）加入量0.020 Is mL/g（Is為皂化值），氯化鋅（1.6 mol/L）加入量0.010 Is mL/g，氯化鋅加入時(shí)間15 min，冷凍分離鋅皂，之后用正己烷萃取。真空濃縮正己烷溶液至干，得富含生育酚、甾醇和角鯊烯的粗提物。粗提物中生育酚純度為51.27％，提取率為95.83％。
　　2)生育酚純化工藝:通過(guò)靜態(tài)吸附試驗(yàn)，確定了

5、717強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂對(duì)生育酚的吸附量為419.0 mg/g干樹(shù)脂。動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)，無(wú)水乙醇洗脫，5％乙酸乙醇溶液解吸，收集淡黃色和黃色段餾分，減壓蒸餾除去溶劑，即得到生育酚濃縮產(chǎn)品。純化后生育酚產(chǎn)品純度為72.13％，提取率為84.29％。
　　3)甾醇結(jié)晶純化工藝:以總甾醇回收率和純度為指標(biāo)，考察結(jié)晶溶劑、料液比、初溫、養(yǎng)晶溫度和養(yǎng)晶時(shí)間等因素對(duì)工藝的影響，選取最佳結(jié)晶工藝:結(jié)晶溶劑為乙醇，液比為原料∶乙醇=1∶3(W/V)

6、，在50℃水浴中攪拌溶解，冷卻到室溫。放入-5～5℃的冰箱中冷析24 h。取出快速真空抽濾，-5～5℃的乙醇溶液淋洗晶體。最優(yōu)條件下，甾醇純度為89.28％，提取率為92.37％;經(jīng)兩次重結(jié)晶，甾醇純度可達(dá)95.27％，提取率為72.36％。
　　4)角鯊烯純化工藝:硅膠作為固定相，考察洗脫溶劑、洗脫速度和上樣量等因素對(duì)層析效果的影響。確定最近角鯊烯純化工藝為:上樣量與干硅膠的比例為1∶20，洗脫溶劑正己烷，流速為10 mL/mi