藤黃酸對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其對(duì)STAT3基因表達(dá)的調(diào)控作用.pdf

1、目的：本文旨在研究藤黃酸對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖與凋亡的影響，并探討其是否對(duì)STAT3存在調(diào)控作用，為藤黃酸臨床用于肺腺癌的治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：以不同濃度梯度的藤黃酸處理肺腺癌A549細(xì)胞，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞的增殖活性，采用流式細(xì)胞儀觀察藤黃酸對(duì)細(xì)胞的凋亡的影響。在相差倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。免疫熒光驗(yàn)證STAT3蛋白在A549細(xì)胞中的分布情況及蛋白量表達(dá)變化，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-

2、PCR)和Western blot法檢測不同濃度藤黃酸對(duì)A549細(xì)胞中STAT3mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：藤黃酸(GA)可顯著抑制肺腺癌A549細(xì)胞的生長，抑制率與藥物濃度和作用時(shí)間成正相關(guān)，24h的IC50為(2.81±0.28)umol/L，當(dāng)GA濃度達(dá)8umol/L時(shí)，對(duì)A549的抑制率接近80％，48、72h的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為(1.86±0.01)umol/L及(1.35±0.10)umol/

3、L。流式細(xì)胞儀進(jìn)一步證實(shí)GA可誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡：1.5 umol/L及3 umol/L GA干預(yù)A549細(xì)胞24h后，凋亡率分別為(24.38±1.42)%、(51.60±3.23)%。當(dāng)GA的濃度達(dá)6umol/L時(shí)，A549的凋亡率達(dá)(77.09±1.44)%。加藥前，細(xì)胞貼壁好，可見核及核仁，呈扁平多角形，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)改變，貼壁不佳，染色質(zhì)濃縮，核膜破裂，細(xì)胞逐漸皺縮成團(tuán)，突起消失，并可見凋亡小體

4、。在熒光顯微鏡下，空白對(duì)照組中的細(xì)胞形態(tài)飽滿，STAT3蛋白主要分布在細(xì)胞的胞漿中；經(jīng)DAPI核染后活細(xì)胞可發(fā)出明亮藍(lán)色熒光。3umol/L藤黃酸處理組中，活細(xì)胞明顯減少，其蛋白的熒光強(qiáng)度亦明顯減弱。STAT3基因在肺腺癌A549中呈現(xiàn)高表達(dá)，不同濃度的GA作用后，STAT3的mRNA及蛋白表達(dá)水平均成濃度依賴性下降，且p＜0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：藤黃酸能明顯抑制人肺腺癌細(xì)胞A549的增殖，并誘導(dǎo)其凋亡，其機(jī)制可