RNA干擾抑制CD44的表達(dá)對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖能力的影響.pdf

1、肺癌的發(fā)病率和死亡率近年來都有明顯的增高趨勢(shì)，最重要的原因就是早期診斷困難和腫瘤的早期轉(zhuǎn)移及術(shù)后復(fù)發(fā)。隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，研究者們發(fā)現(xiàn)了許多與腫瘤預(yù)后相關(guān)的因素，如CKs蛋白、p53抑癌基因等，這些生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)肺癌患者的預(yù)后的預(yù)測(cè)都具有重要意義。而具有介導(dǎo)細(xì)胞粘附作用的細(xì)胞表面粘附分子在腫瘤的早期診斷、轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后估計(jì)等方面所體現(xiàn)出的重要價(jià)值已被眾多學(xué)者所關(guān)注。CD44是一種分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，它是一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移

2、和侵襲相關(guān)的重要黏附分子[1]。研究證明CD44在浸潤和轉(zhuǎn)移的多種腫瘤組織中均呈陽性表達(dá)，因此，CD44被認(rèn)為是惡性腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)志物之一[2]。
　　 腫瘤干細(xì)胞學(xué)說認(rèn)為腫瘤組織中存在極小部分具有干細(xì)胞性質(zhì)的細(xì)胞群體，它們具有自我更新能力和不定分化潛能。目前，研究者們正在不斷地尋找它們存在的依據(jù)，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行研究，以便可以從眾多的腫瘤細(xì)胞中將它們分離出來。在我們的前期研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，肺腺癌A549細(xì)胞株中存在小部分具有

3、持續(xù)增殖分裂能力的細(xì)胞，其表面抗原CD44的陽性表達(dá)率明顯高于普通A549腫瘤細(xì)胞。該群CD44陽性細(xì)胞具有自我復(fù)制和分化能力，而且在裸鼠體內(nèi)的成瘤能力明顯強(qiáng)于其他細(xì)胞亞群[3]。據(jù)此我們初步認(rèn)為CD44可能是肺腺癌干細(xì)胞的表面標(biāo)記物之一。為了驗(yàn)證上述論點(diǎn)，我們以肺腺癌A549細(xì)胞為研究對(duì)象，通過RNAi技術(shù)，抑制其CD44表達(dá)，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行觀察，以期更加深入了解CD44在肺腺癌增殖能力中所起的作用。
　　 第一章肺腺癌

4、中CD44的表達(dá)情況及其與臨床分期、腫瘤細(xì)胞分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系
　　 目的：探討CD44在肺腺癌中的表達(dá)及其與臨床分期、腫瘤細(xì)胞分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　 方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)77例肺腺癌中CD44蛋白的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床分期、細(xì)胞分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示：77例肺腺癌中，CD44陽性表達(dá)率是50.6％。通過對(duì)各個(gè)分類中CD44的表達(dá)情況進(jìn)行分析，我

5、們發(fā)現(xiàn)：(1)CD44表達(dá)與臨床分期有一定的正相關(guān)，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無顯著性，我們考慮主要和樣本量不足有關(guān)；(2)CD44表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的分化程度有顯著負(fù)相關(guān)性(P＜0.05)；(3)CD44在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)率為77.1％，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的28.6％，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性正相關(guān)(P＜0.01)。
　　 第二章肺腺癌A549細(xì)胞株CD44流式分選及增殖能力檢測(cè)
　　 目的：研究肺癌A549細(xì)胞中CD44表達(dá)與增殖能

6、力的關(guān)系
　　 方法：使用流式細(xì)胞儀分選肺腺癌A549細(xì)胞株，根據(jù)CD44的表達(dá)分為CD44+和CD44-兩組。MTS法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖能力。
　　 結(jié)果：CD44陽性含量是38.8％。使用MTS法測(cè)定兩組細(xì)胞的生長曲線，可以發(fā)現(xiàn)各組細(xì)胞均有不斷增殖趨勢(shì)，但CD44陽性細(xì)胞的增殖速度較陰性細(xì)胞快。細(xì)胞計(jì)數(shù)圖顯示CD44陰性表達(dá)組的增殖能力較陽性表達(dá)組及未分選組明顯減弱。第三章探索干擾抑制CD44的表達(dá)對(duì)肺腺

7、癌A549細(xì)胞增殖能力的影響
　　 目的：驗(yàn)證CD44與肺腺癌A549細(xì)胞增殖能力的關(guān)系方法：運(yùn)用RNAi技術(shù)抑制A549細(xì)胞CD44的表達(dá)，通過MTS法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)干擾前、干擾后以及對(duì)照組的細(xì)胞增殖能力。
　　 結(jié)果：MTS顯示：轉(zhuǎn)染后的腫瘤細(xì)胞活力較轉(zhuǎn)染前有顯著下降。細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示：轉(zhuǎn)染siRNA-CD44細(xì)胞的倍增速度與其他組比較，在第四天開始出現(xiàn)明顯的減慢；轉(zhuǎn)染后組的MTS和細(xì)胞計(jì)數(shù)曲線均向轉(zhuǎn)染前陰性組靠攏。<