粟酒裂殖酵母中PPR蛋白Ppr10與Mpa1相互作用的研究.pdf

1、PPR蛋白含有35個氨基酸串聯(lián)排列（2-30重復序列），這些重復序列稱為PPR重復單元并且可以通過氨基酸序列特異地結(jié)合單鏈RNA，參與RNA加工、編輯、剪切等。在人類中，PPR蛋白在包括導致Leigh綜合癥在內(nèi)的眾多生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。在植物中，大多數(shù)PPR蛋白對葉綠體的加工或翻譯有重要作用，進一步研究還發(fā)現(xiàn)PPR蛋白參與了RNA的編輯。粟酒裂殖酵母中最近初步解析了之前報道的9個PPR蛋白的部分功能，它們都參與線粒體RNA的表

2、達及調(diào)控。Ppr10作為一個新鑒定的PPR蛋白它的功能至今尚不清楚。本文研究發(fā)現(xiàn)缺失ppr10的菌株在穩(wěn)定期后期出現(xiàn)大量死亡;Ppr10不影響線粒體編碼RNAs的加工及穩(wěn)定;通過RNA免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)Ppr10可以結(jié)合線粒體編碼的mRNA。
　　本文通過串聯(lián)親和純化(TAP)技術(shù)純化Ppr10蛋白復合體時得到一個與其相互作用的蛋白，將其命名為Mpa1。經(jīng)免疫共沉淀實驗證明在粟酒裂殖酵母體內(nèi)它們之間確實存在相互作用，并且這種相互作用并

3、不借助于RNA的參與;進一步研究發(fā)現(xiàn)Mpa1的其中一個功能是維持Ppr10在酵母體內(nèi)的穩(wěn)定性，當缺失Mpa1時Ppr10在酵母體內(nèi)的蛋白含量明顯減少，但是ppr10 mRNA水平?jīng)]有明顯的變化，最終發(fā)現(xiàn)Ppr10蛋白含量的減少是被線粒體基質(zhì)蛋白酶Lon1所降解。Mpa1在酵母體內(nèi)的含量則不受Ppr10的影響。粟酒裂殖酵母中存在線粒體翻譯起始因子Mti2和Mti3，經(jīng)免疫共沉淀證明Ppr10與Mti2存在相互作用。這些實驗結(jié)果提示Ppr1