轉TrxS基因啤酒大麥種子蛋白質組學分析.pdf

1、啤酒大麥籽粒蛋白質含量的高低及其在制麥過程中代謝速率的快慢是決定其釀造品質優(yōu)劣的關鍵。本文首先以轉外源TrxS基因啤酒大麥株系Franklin及Harrington(分別以F、H表示)的種子為試驗材料,利用分步提取法分析轉基因及對照株系在籽粒萌發(fā)前后胚乳貯藏蛋白組分的含量變化,以及利用SDS-PAGE技術尋找差異表達蛋白,試圖從蛋白組學角度探索導入外源TrxS基因對啤酒大麥種子萌發(fā)速率的影響及對其品質改良方面的可行性；其次,以2個轉Tr

2、xS基因啤酒大麥矮化株系H-7-5-14-2和H-7-5-14-5為試驗材料,以轉基因正常株系及非轉基因H-CK為對照,在對其花后15d成熟植株株高農藝表型進行統(tǒng)計分析的基礎上,采用傳統(tǒng)TCA-Ac法提取轉基因矮化株系H-7—5-14-2的種子及幼苗(三葉期)葉片總蛋白(以H-CK為對照),通過雙向凝膠電泳技術對其表達譜分別做了初步研究。主要研究結果如下:
　　 1.對成熟期及萌發(fā)期種子貯藏蛋白的含量測定結果表明,轉TrxS基因

3、株系種子胚乳內總蛋白及貯藏蛋白組分的含量與非轉基因對照間無顯著差異；萌發(fā)2d時,轉基因株系胚乳中總蛋白迅速分解、含量下降,球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白含量變化趨勢與總蛋白類似,含量迅速下降(個別株系有例外),清蛋白含量上升,并與對照間達極顯著水平。
　　 2.供試株系籽粒萌發(fā)前后胚乳內貯藏蛋白組分SDS-PAGE圖譜顯示:(1)清蛋白圖譜中,籽粒萌發(fā)2d時,高分子量條帶數減少,相應低分子量約10-16 kD處的蛋白條帶數目增加；(2

4、)球蛋白圖譜中,F株系籽粒未萌發(fā)時,在66.2-94.0 kD和35.0-45.0 kD之間各有一條表達量明顯不同的蛋白條帶；H-CK籽粒萌發(fā)2d時,在靠近66.2 kD下方及45.0 kD上方各有一蛋白條帶發(fā)生降解,在其相應各轉基因株系中未能看到這一變化；(3)醇溶蛋白圖譜中,F、H-CK與其各自轉基因株系相比,在35.0-45.0 kD之間均出現一條特異表達的蛋白條帶,籽粒萌發(fā)2d時,該條帶未見降解；(4)谷蛋白圖譜中,籽粒萌發(fā)前后