晚期糖基化終產(chǎn)物受體及其基因多態(tài)性與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分:晚期糖基化終產(chǎn)物受體與不同年齡冠心病患者的相關(guān)性研究
　　背景:隨著我國社會、經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronaryatherosclerotic heart disease，CHD，簡稱冠心病)的患病率和死亡率呈逐年上升趨勢。雖然經(jīng)過藥物、PCI以及手術(shù)等積極治療，但我國冠心病的發(fā)病率和死亡率仍未能下降。這個現(xiàn)象要求我們對冠心病的發(fā)病機(jī)制重新審視，要努力尋找除了高齡、高血糖、高血壓、高脂血癥、男性、

2、肥胖、有冠心病家族史等既往傳統(tǒng)的心血管危險因素以外的發(fā)病機(jī)理和危險因素。越來越多的研究證實(shí)動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)實(shí)際上是一種由多種的炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)參與在其中的慢性炎癥反應(yīng)性疾病。隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)晚期糖基化終產(chǎn)物受體（Receptor of Advanced Glycation End Products，RAGE）與晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，

3、AGEs)等配體相互作用對于動脈粥樣硬化進(jìn)程中起著舉足輕重的作用。
　　晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)屬于細(xì)胞表面的免疫球蛋白超家族成員的跨膜受體，能與多種配體結(jié)合，它是晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)最重要的受體。RAGE還能與其他許多配體相結(jié)合，如S100/鈣粒家族成員，高遷移率族蛋白1（high-mobility group box-1，HMGB1）等。有研究表明作為糖基化終產(chǎn)物(AGEs)及其受體(RAGE)在動脈粥樣硬化進(jìn)

4、程中發(fā)揮了重要作用。AGEs與RAGE結(jié)合后影響細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)、刺激細(xì)胞因子釋放，引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的增加，造成內(nèi)皮功能不全，與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（簡稱冠心?。╆P(guān)系密切。S10012A-RAGE結(jié)合后，經(jīng)過細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路使ROS、NF-κB等激活，參與多種基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)，促進(jìn)血管黏附因子-1（VCAM-1）、細(xì)胞間黏附因子-1(ICAM-1)、白介素-1、6、8(IL-1、6、8)等釋放，使細(xì)胞之間、細(xì)胞與血管之間的黏附

5、件提高，引起單核巨噬細(xì)胞的位移、質(zhì)多糖(LPS)入侵，導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展?？扇苄酝砥谔腔K產(chǎn)物受體(sRAGE)是RAGE的C末端剪切體之一，它僅僅含有胞外區(qū)。sRAGE可以競爭性地阻斷配體與RAGE相結(jié)合，抑制RAGE的病理作用，是冠心病的保護(hù)性因子。既往研究發(fā)現(xiàn)了，RAGE與冠心病的相關(guān)性。RAGE在冠心病患者表達(dá)增多，而其血清中sRAGE水平下降。但RAGE對冠心病的作用機(jī)制目前仍未完全詮釋，而且目前為止鮮有RAGE在

6、老年冠心病患者中的作用及其相關(guān)機(jī)制的相關(guān)報道。
　　目的:研究晚期糖基化終產(chǎn)物受體與不同年齡冠心病患者的相關(guān)性，關(guān)注其對冠心病的作用機(jī)制，特別是對老年人冠心病的作用及機(jī)制。
　　方法:
　　選取江蘇省人民醫(yī)院心血管科收治的胸痛患者，每位患者均行經(jīng)皮冠狀動脈造影術(shù)(CAG)以明確診斷，按照患者的年齡分為成年人組共272名（年齡＜60歲）和老年人組（年齡≥60歲）共268名;再根據(jù)冠脈造影結(jié)果，將每組分為三個亞組:冠心病亞

7、組（前降支、回旋支、右冠中至少有一支主要血管管腔狹窄≥50％）、冠狀動脈粥樣硬化患者（冠狀動脈有粥樣硬化斑塊，但管腔狹窄＜50％）和冠脈造影正常亞組。收集每位入選患者的一般臨床資料，了解合并疾病及目前服藥情況。每位入選的患者均在入院后行二維超聲心動圖檢查并留取清晨空腹外周靜脈血血液樣品6ml，4ml送至江蘇省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測血常規(guī)、生化及凝血功能;另外2ml留作血清學(xué)檢測。對于確診冠心病的患者留取PCI術(shù)前、術(shù)后冠脈口處血液樣本。使用

8、雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫熒光法(ELISA)測定靜脈血及冠脈口血液的血清中sRAGE、S100A12和VCAM-1濃度水平。對于每位患者記錄冠脈造影結(jié)果，根據(jù)結(jié)果進(jìn)行Gensini評分。研究不同年齡組冠心病與sRAGE、S100A12和VCAM-1濃度的相關(guān)性;比較不同年齡冠心病患者sRAGE、S100A12和VCAM-1濃度的差異;研究這些指標(biāo)與Gensini評分的相關(guān)性，以此判斷sRAGE、S100A12和VCAM-1濃度與冠脈病變嚴(yán)重

9、程度的相關(guān)性。同時觀察冠脈造影檢查及PCI術(shù)是否對這些指標(biāo)的濃度是否有影響。
　　結(jié)果:
　　(1)成年人組:與冠脈造影正常亞組相比，冠心病亞組血清sRAGE水平顯著下降（87.7±50.1 ng/L vs113.1±58.5 ng/L，P＜0.05）、S100A12水平顯著升高（6.6±6.1 ug/L vs5.9±5.0 ug/L，P＜0.05）、VCAM-1水平顯著升高（86.3±77.3ug/L vs77.2±62.

10、5 ug/L，P＜0.05），均有統(tǒng)計學(xué)差異;冠狀動脈粥樣硬化亞組sRAGE水平顯著下降（94.7±60.5 ng/L vs113.1±58.5 ng/L，P＜0.05）、VCAM-1水平顯著升高（84.1±58.6 ug/L vs77.2±62.5 ug/L，P＜0.05），均有統(tǒng)計學(xué)差異，S100A12水平有所升高（6.2±4.9ug/Lvs5.9±5.0ug/L，P＞0.05），但無統(tǒng)計學(xué)差異。與冠狀動脈粥樣硬化亞組相比，冠心病亞

11、組sRAGE的水平下降（87.7±50.1 ng/L vs94.7±60.5 ng/L，P＞0.05），S100A12、VCAM-1的水平升高(6.6±6.1 ug/L vs6.2±4.9 ug/L,P＞0.05)、(86.3±77.3 ug/L vs84.1±58.6 ug/L,P＞0.05)，但均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(2)老年人組:與冠脈造影正常亞組相比，冠心病亞組血清sRAGE水平顯著下降（76.6±56.1 ng/L vs

12、104.6±61.1 ng/L，P＜0.05）、S100A12、VCAM-1水平顯著升高（7.3±6.9 ug/L vs6.5±5.8 ug/L，P＜0.05）、(96.4±78.0 ug/L vs84.5±66.2ug/L，P＜0.05);冠狀動脈粥樣硬化亞組sRAGE水平顯著下降（79.5±78.5 ng/Lvs104.6±61.1 ng/L，P＜0.05），S100A12、VCAM-1水平也有所升高(6.9±6.3ug/L vs6

13、.5±5.8 ug/L,P＞0.05)、(90.1±65.2 ug/L vs84.5±66.2 ug/L,P＞0.05),但無統(tǒng)計學(xué)差異。與動脈粥樣硬化亞組相比，冠心病亞組的血清sRAGE水平降低（76.6±56.1 ng/L vs79.5±78.5 ng/L,P＞0.05）、S100A12(7.3±6.9 ug/L vs6.9±6.3 ug/L,P＞0.05)、VCAM-1(96.4±78.0 ug/L vs90.1±65.2 ug/

14、L，P＞0.05)含量增加，但均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(3)sRAGE與Gensini評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.505，P＜0.01);S100A12、VCAM-1與Gensini評分呈正相關(guān)(r=0.534，P＜0.01)、(r=0.619，P＜0.01)，均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(4)與成年組相比，老年人組sRAGE水平顯著下降(76.6±56.1 ng/L vs87.7±50.1 ng/L,P＜0.05)，S100A12(7

15、.3±6.9 ug/L vs6.6±6.1 ug/L,P＜0.05)、VCAM-1(96.4±78.0 ug/L vs86.3±77.3 ug/L，P＜0.05)水平顯著升高，均有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　(5)與PCI術(shù)前相比，無論是成年人組還是老年人組，患者PCI術(shù)后冠脈口血液中sRAGE含量顯著下降(95.3±78.5 ng/L vs112.4±72.9 ng/L，P＜0.05)、(83.3±53.1ng/L vs94.1±45.5

16、 ng/L，P＜0.05); VCAM-1水平顯著升高(91.4±75.3ug/L vs83.1±66.5ug/L，P＜0.05)、(114.3±92.5 ug/L vs95.3±78.5 ug/L,P＜0.05);S100A12含量(6.3±5.1 ug/L vs6.0±5.0 ug/L,P＞0.05)、(7.3±6.9 ug/L vs7.1±6.9 ug/L，P＞0.05)有所升高，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　(

17、1)RAGE與冠心病發(fā)病及其嚴(yán)重程度相關(guān)，隨著年齡的增大，RAGE的病理作用越明顯。冠心病患者中sRAGE水平下降、S100A12、VCAM-1水平升高。同時sRAGE與Gensini評分呈負(fù)相關(guān)，S100A12、VCAM-1與Gensini評分呈正相關(guān)。冠心病患者中，老年冠心病患者血清sRAGE水平比成年組顯著下降，S100A12、 VCAM-1水平顯著升高。
　　(2)PCI術(shù)使冠心病患者經(jīng)歷缺血再灌注損傷，PCI術(shù)后冠脈口血

18、液中VCAM-1水平顯著升高、S100A12含量也有所升高;而sRAGE含量顯著下降。
　　第二部分:晚期糖基化終產(chǎn)物受體基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性研究
　　背景:冠心病的發(fā)病與許多危險因素相關(guān)，如高齡、男性、高血壓、高血糖、高脂血癥等。近期研究發(fā)現(xiàn)慢性炎癥反應(yīng)是冠心病發(fā)病的本質(zhì)。不同的機(jī)制都可以引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，晚期糖基化終產(chǎn)物受體及其配體系統(tǒng)的病理作用在這些機(jī)制中備受矚目。
　　由于RAGE對機(jī)體的重要作用，

19、尤其是對心血管疾病如冠心病的發(fā)病機(jī)理方面中的作用都與其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)相關(guān)，所以RAGE基因多態(tài)性(Genepolymorphism)及其對疾病遺傳易感性的影響受到越來越多的重視，特別是在心血管領(lǐng)域。RAGE-G82S位于RAGE基因外顯子3區(qū)域，研究發(fā)現(xiàn)多種疾病發(fā)生的遺傳易感性可能與RAGE-G82S(rs2070600)突變有關(guān)，如冠心病、糖尿病視網(wǎng)膜病等。RAGE基因啟動子區(qū)域存在-429T/C(rs1800625)多態(tài)性，該基因多

20、態(tài)性與糖尿病視網(wǎng)膜病(diabetic retinopathy，DR)、糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)相關(guān)。近來確定RAGE基因內(nèi)含子區(qū)域也存在基因多態(tài)性2184A/G(rs3134940)，該基因多態(tài)性的作用日益受到研究者的重視。
　　目前，這些基因多態(tài)性與冠心病的發(fā)病及冠心病的嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究眾多，但結(jié)果卻不盡相同。因此，RAGE基因多態(tài)性與我國漢族人群冠心病的關(guān)系還需要我們進(jìn)一步的研究。

21、r>　　目的:分析我國江蘇地區(qū)漢族人群中RAGE基因多態(tài)性G82S(rs2070600)、-429T/C(rs1800625)、2184A/G(rs3134940)是否與冠心病的發(fā)病有關(guān)，并觀察sRAGE與這些基因多態(tài)性的相關(guān)性。
　　方法:選取江蘇省人民醫(yī)院老年心血管科2016年01月-2017年02月之間收治的臨床上疑似冠心病入院的患者，均為江蘇地區(qū)漢族人，年齡＞60歲，男女均可納入，所有患者都予經(jīng)皮冠狀動脈造影術(shù)(CAG)。

22、術(shù)后根據(jù)冠脈造影結(jié)果，將患者分為冠心病患者及非冠心病患者。收集所有患者的臨床資料、合并疾病、用藥情況，行二維超檢查?？崭沽羧⊥庵莒o脈血，其中4ml送檢血常規(guī)、生化;2ml離心后取血清，應(yīng)用試劑盒測定血清sRAGE水平;另2mlEDTA抗凝血應(yīng)用提取外周血細(xì)胞DNA，設(shè)計引物，進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，通過SnaPshot多重單堿基延伸反應(yīng)，并測定基因多態(tài)性結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　(1)RAGE2184A/G(rs3134940)基

23、因多態(tài)性中，雜合子AG基因型發(fā)生冠心病OR值是1.23(0.61-2.50)，經(jīng)年齡、性別、吸煙以及合并疾病等多因素調(diào)整后，OR值是1.37(0.60-3.11)，均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。GG基因型冠心病發(fā)病OR值為2.66(0.93-7.65)，多因素調(diào)整后OR變?yōu)?.80(0.58-5.61)，都沒有無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。AG+GG基因型對冠心病影響的OR值為1.54(0.78-3.01)沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05

24、)，即使調(diào)整后也是如此，OR值為1.49(0.67-3.28)，P＞0.05。
　　(2)RAGE G82S(rs2070600)基因多態(tài)性中，AG基因型對冠心病影響的OR值多因素調(diào)整前后為0.62(0.30-1.28)、0.81(0.35-1.87)，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。GG基因型冠心病發(fā)病的OR值多因素調(diào)整前后為0.96(0.44-2.07)、1.03(0.43-2.48)，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。AG+GG基

25、因型冠心病發(fā)病的OR值多因素調(diào)整前后為0.66(0.34-1.30)、0.83(0.38-1.82)，仍然沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(3)RAGE-429T/C(rs1800625)是2184A/G(rs3134940)的連鎖基因，TC基因型、CC基因型以及TC+CC基因型都與冠心病的發(fā)病無相關(guān)性(P＞0.05)。
　　(4)盡管非冠心病組sRAGE水平顯著高于冠心病組(58.04±5.35 ng/L vs41.

26、18±3.44 ng/L，P＜0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但sRAGE與RAGE基因多態(tài)性基因型的相關(guān)性分析顯示:在冠心病組，與rs3134940 AA基因型相比，AG基因型及GG基因型患者血清sRAGE水平無顯著性差異(46.87±8.57 ng/L vs38.24±3.83 ng/L，P＞0.05)及(45.86±8.59 ng/L vs38.24±3.83 ng/L，P＞0.05)與rs2070600 AA基因型相比，AG基因型

27、及GG基因型患者血清sRAGE水平無統(tǒng)計學(xué)差異(37.07±7.02 ng/L vs42.13±4.07 ng/L，P＞0.05)及(43.85±17.47 ng/L vs42.13±4.07ng/L，P＞0.05)。在非冠心病組，sRAGE水平在rs3134940AG基因型及GG基因型患者中與AA型差異無統(tǒng)計學(xué)意義(56.52±13.79 ng/L vs58.97±5.66 ng/L，P＞0.05)及(35.29 ng/L vs58.

28、97±5.66 ng/L，P＞0.05)。與野生型rs2070600AA基因型相比，AG基因型、GG基因型患者血清sRAGE水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(68.16±10.0 ng/L vs55.02±6.62 ng/L，P＞0.05)及(36.57±15.60 ng/L vs55.02±6.62 ng/L，P＞0.05)。 rs1800625是rs3134940的連鎖基因，與rs3134940所有結(jié)果相同，sRAGE與rs3134940 TC

29、、 CC基因型均沒有相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　(1)RAGE G82S(rs2070600)基因多態(tài)性、RAGE2184A/G(rs3134940)基因多態(tài)性、RAGE-429T/C(rs1800625)基因多態(tài)性都與江蘇地區(qū)漢族人冠心病無相關(guān)性。
　　(2)不管是在冠心病組還是非冠心病組，sRAGE與RAGE基因G82S(rs2070600)、2184A/G(rs3134940)及-429T/C(rs1800625)