副溶血弧菌生物菌膜形成特性及亞甲基藍光動力滅活作用研究.pdf

1、副溶血弧菌是生長在溫暖海洋水域環(huán)境中的嗜鹽菌，也是導致海產(chǎn)品食物中毒的主要致病菌。本文以副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus。V.parahaemolyticus)標準菌株ATCC17802為實驗菌，研究其在玻璃表面形成生物菌膜的生長特性及超聲波的解離作用；采用亞甲基藍為光敏劑，探究光動力殺菌技術對副溶血弧菌生物菌膜的滅活作用；研究D-酪氨酸對副溶血弧菌生物菌膜形成的抑制作用及對光動力技術滅菌效果的影響；使用激光共

2、聚焦掃描顯微鏡觀察光動力滅菌技術對副溶血弧菌生物菌膜的滅活效果。
　　主要研究結果如下：
　　1.副溶血弧菌生物菌膜經(jīng)結晶紫染色后在顯微鏡下觀察，結果表明結晶紫染色法可以用于直接觀察細菌生物菌膜，操作簡單易行。副溶血弧菌從單個浮游菌到形成生物菌膜是一個復雜但有序的過程，從浮游菌附著于物體表面到逐漸形成生物菌膜，菌體數(shù)量從少到多，菌膜形態(tài)從稀疏到緊密，結構從簡單到復雜，在生長過程中生物菌膜也趨于成熟。在培養(yǎng)副溶血弧菌生物菌膜時

3、，隨著培養(yǎng)時間延長，菌膜的生物量不斷增加，且在最初的0-24h時生物量增長顯著，24h后增長速度逐漸減緩以至趨于平衡。在生物菌膜生長成熟后期，其生物量甚至會略微下降。
　　2.副溶血弧菌生物菌膜生物量變化的測定結果表明，環(huán)境因素對菌膜形成的影響顯著，當培養(yǎng)基鹽度3％，培養(yǎng)時間24h,培養(yǎng)轉速70r/min時得到的副溶血弧菌生物菌膜已經(jīng)生長成熟且菌體個數(shù)達到2.56×107CFU/cm2。采用頻率為50kHz超聲波，間歇式超聲處理法

4、(每作用30s間隔30s)，在作用總時間為4min時可在保持副溶血弧菌菌體活性的同時達到最佳菌膜解離效果。
　　3.光動力滅菌技術(Anti-microbial photodynamic technology,APDT)對副溶血弧菌生物菌膜滅活效果顯著，且影響滅活效果的主要因素為光敏劑亞甲基藍的濃度及光照時間。在相同的光照時間處理下，不斷增大光敏劑的濃度(0.1-1000μg/mL)，光動力滅活作用愈顯著。當亞甲基藍濃度一定時(1

5、0μg/mL)，隨著光照時間(1-20min)延長，滅菌效果也逐漸增強。在同樣的滅菌條件下，生物菌膜的對APDT的抗性比浮游菌強10-100倍。激光共聚焦掃描顯微鏡觀察法能對生物菌膜熒光顏色進行直觀分析，并且用來表征亞甲基藍對副溶血弧菌生物菌膜的滅活效果。當延長APDT光照時間或者加大亞甲基藍作用濃度時，菌膜呈現(xiàn)出較多的紅色熒光，表明細菌的滅活量大，光動力效果顯著。
　　4.D-酪氨酸對副溶血弧菌生物菌膜的形成具有明顯的抑制作用，