亞甲基藍光化學法對全血中人免疫缺陷Ⅰ型病毒（HIV-1）的滅活研究.pdf

1、本課題以噬菌體f2、日本腦炎病毒(JEV)和人免疫缺陷Ⅰ型病毒(HIV-1)為試驗病毒，對短波紫外線(UVC)照射法、γ-射線照射法、核黃素(Riboflavin)光化學法、金絲桃素(Hypericin)光化學法和亞甲基藍(Methyleneblue，MB)等五種光化學法的滅活血液中病毒效果進行評價；通過正交試驗篩選最佳方法的最適作用條件，并充分驗證其滅活病毒效果。為評價處理方法的毒性作用，分別以昆明種小鼠和日本大耳白兔為實驗動物，對M

2、B產生的急性和慢性毒性進行觀察，通過自動生化檢測儀對實驗動物的肝腎功能進行檢測；采用微核試驗測定兔淋巴細胞微核率以及多核細胞法測定兔淋巴細胞Hprt基因位點突變頻率，研究MB的致突變作用。 試驗結果顯示：1.在篩選試驗的最大作用劑量下，UVC(1500μW/cm2)、核黃素(40μmol/L)+可見光(40000Lux)、金絲桃素(20μmol/L)+可見光(40000Lux)、MB(10μmol/l)+可見光(40000Lux

3、)分別作用40min以及γ射線作用400Gy使血液中的f2噬菌體分別下降1.46log、1.10log、2.25log、4.27log、5.37log，同時血漿游離Hb分別增加279.52mg/l、8444.31mg/l、2.72mg/l、3.36mg/l、3.05mg/l。按照既能有效滅活血液中的病毒，又能保持血液的成份和功能沒有明顯變化的原則，初步篩選出的最佳消毒方法是MB光化學法。 2.正交實驗顯示，MB光化學效應對血液中

4、病毒的滅活作用受MB含量、可見光照射強度和照射時間等因素的影響。試驗篩選的最佳處理條件(15μmol/LMB+40000Lux照度的鹵鎢燈照射40min)下可以使f2噬菌體下降超過5個對數(shù)級。MB與可見光照射兩因素的T/E值大于1，具有顯著協(xié)同增效作用。 3.在設計的光化學應用模型處理下，當MB終濃度為15μmol/L、可見光照度為40000Lux時，全血中的日本腦炎病毒在照射20min時被完全滅活，滅活滴度為7.0LogTCI

5、D50；在40000Lux光照條件下，當與5μmol/L的MB聯(lián)合作用30min，10μmol/L的MB聯(lián)合作用20min，15μmol/L的MB聯(lián)合作用10min均可完全滅活血液中的HIV-1病毒，滅活滴度為5.78LogTCID50。 4.MB對小鼠的急性毒性試驗結果顯示：當小鼠體內MB濃度(15mmol/kg)為試驗濃度(15μmol/l)的800倍時，小鼠未見死亡。試驗組與對照組小鼠體重變化無明顯差異(P＞0.05)。全

6、自動生化分析結果表明各組小鼠肝腎功能無顯著差異(P＞0.05)，均維持在正常值范圍內。 5.MB對兔的慢性毒性試驗結果顯示：當兔體內MB濃度(604μmol/kg)為試驗濃度(15μmol/l)的80倍時，兔未見死亡，全自動生化分析結果表明各組兔肝腎功能無顯著差異(P＞0.05)，均維持在正常值范圍內。 6.慢性毒性試驗結束后，兔外周血淋巴細胞微核試驗顯示，試驗組的微核率均值(2.14±1.0‰)與陰性對照組的微核率均值