光譜法結(jié)合高效液相色譜法定量分析殼聚糖.pdf

1、研究目的：
　　建立功能性食品等樣品中殼聚糖準(zhǔn)確定量的方法體系。
　　研究方法：
　　殼聚糖在弱酸性溶液中由于質(zhì)子化而產(chǎn)生氨基陽離子，利用靜電引力和疏水作用力與陰離子染料結(jié)合成穩(wěn)定的離子締合物，根據(jù)結(jié)合后體系光譜學(xué)特征的改變，建立多種共振瑞利散射法和熒光猝滅法定量分析殼聚糖。優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件；探索分子量的影響，并尋找解決解決殼聚糖分子量影響的方法；探索多種共存物質(zhì)的影響并尋找合適的離子掩蔽劑；利用所建立的共振瑞利散射及熒光

2、猝滅新方法測(cè)定樣品中殼聚糖含量。并將熒光猝滅法與共振瑞利散射法測(cè)定結(jié)果相比較。HPLC法先將殼聚糖在氮?dú)獗Ｗo(hù)下水解成氨基葡萄糖，通過測(cè)定氨基葡萄糖衍生化產(chǎn)物間接測(cè)定殼聚糖含量，并將此結(jié)果與紫外分光光地法測(cè)得氨基葡萄糖結(jié)果相比較。
　　研究結(jié)果：
　　1、胭脂紅、剛果紅作探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖的含量
　　胭脂紅、剛果紅與殼聚糖在B-R緩沖溶液體系中結(jié)合，能引起溶液的共振瑞利散射(RRS)顯著增強(qiáng)?？疾炝诉m宜的結(jié)合

3、條件、影響因素以及共振瑞利散射與殼聚糖濃度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)一定濃度的殼聚糖與散射增強(qiáng)（ΔI）成正比。據(jù)此，建立了殼聚糖含量的測(cè)定的新方法，且方法的靈敏度較高，其中殼聚糖-胭脂紅體系檢測(cè)限0.019μg/mL，剛果紅-殼聚糖體系檢測(cè)限0.044μg/mL。胭脂紅作探針的共振瑞利散射法在低濃度時(shí)不受殼聚糖分子量的影響。剛果紅作探針的共振瑞利散射法不受殼聚糖分子量的影響。用于現(xiàn)有保健藥品中殼聚糖和殼聚糖負(fù)載鑭除氟后水樣中殼聚糖的定量分析，結(jié)果令人

4、滿意。
　　2、水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠B作探針的共振瑞利散射法測(cè)定殼聚糖的含量
　　在弱酸性條件下，考察了殼聚糖與水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠B的結(jié)合情況，建立了兩種水浴條件下大大增強(qiáng)殼聚糖-染料離子締合物共振瑞利散射強(qiáng)度的新方法。結(jié)果顯示在適宜的反應(yīng)條件下，水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠B與殼聚結(jié)合形成離子締合物，能引起溶液的共振瑞利散射(RRS)顯著增強(qiáng)。殼聚糖-水溶性苯胺藍(lán)體系在0.01~3.5μg/mL范圍內(nèi)與殼聚糖濃度呈線性關(guān)系，其檢

5、測(cè)限6.94 ng/mL。殼聚糖-萘酚綠B體系在0.01~5.5?g/mL范圍內(nèi)與殼聚糖濃度呈線性關(guān)系，其檢測(cè)限8.87 ng/mL。更為重要的是，本文研究了殼聚糖分子量對(duì)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響，發(fā)現(xiàn)這兩種方法均不受殼聚糖分子量的影響。水溶性苯胺藍(lán)、萘酚綠B作探針的共振瑞利散射法是兩種優(yōu)越的檢測(cè)方法，有簡(jiǎn)單、高靈敏度、準(zhǔn)確性好的特點(diǎn)。
　　3、殼聚糖-活性紅4締合體系的熒光猝滅與共振瑞利散射光譜研究及其在殼聚糖定量分析中的應(yīng)用

6、>　　在弱酸性B-R緩沖體系中，殼聚糖對(duì)活性紅4存在熒光猝滅作用，在λex/λem=285 nm/341 nm波長(zhǎng)處，0.050~2.00μg/mL的濃度范圍內(nèi)，其熒光猝滅程度與殼聚糖濃度呈良好的線性關(guān)系。線性方程為：ΔF=68.78c+2.648(c，μg/mL)。R2=0.9992，檢出限為0.039μg/mL。在相同的介質(zhì)環(huán)境下，殼聚糖-活性紅4離子締合體系于λ=342 nm有共振瑞利散射特征峰，在0.050~6.00μg/mL的

7、濃度范圍內(nèi)，線性方程為：ΔI=681.31c+114.95(c，μg/mL)，R2=0.9991，檢測(cè)限0.033μg/mL。據(jù)此，建立了以活性紅4為探針定量分析殼聚糖的兩種新方法：熒光猝滅法和共振瑞利散射法。同時(shí)，將兩種方法就殼聚糖分子量對(duì)測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的影響進(jìn)行了研究。將兩種新方法應(yīng)用于實(shí)際樣品的定量檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果基本一致，且回收率結(jié)果令人滿意。
　　4、氮?dú)獗Ｗo(hù)下酸水解結(jié)合分光光度法、HPLC法測(cè)定殼聚糖含量
　　本研

8、究以殼聚糖水解液中氨基葡萄糖的產(chǎn)率為指標(biāo)，在氮?dú)獗Ｗo(hù)的環(huán)境下對(duì)殼聚糖水解條件進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)選最佳水解條件。TLC結(jié)果顯示氮?dú)獗Ｗo(hù)下酸水解殼聚糖的最終產(chǎn)物為氨基葡萄糖，且水解時(shí)間越長(zhǎng)，其產(chǎn)率越高。UV-Vis法測(cè)定結(jié)果顯示，在100℃6 mol/L的HCl中水解54h水解產(chǎn)率更高。比較UV-Vis法和HPLC法對(duì)氨基葡萄糖的測(cè)定結(jié)果，顯示HPLC法殼聚糖含量測(cè)定結(jié)果明顯低于UV-Vis法，這可能與HPLC測(cè)定的專一性和殼聚糖HCl水解的不完